विवरण
प्रोटीन पृथक्करण को साकार करने के लिए प्रोटीन वैद्युतकणसंचलन के लिए अक्सर पॉलीएक्रिलामाइड जेल (PAGE जेल) का उपयोग किया जाता है। इस तरह का जेल आम तौर पर केंद्रित जेल और पृथक्करण जेल से बना होता है। पूर्व प्रोटीन नमूनों को केंद्रित करने की भूमिका निभाता है, जबकि बाद वाला जेल में इस्तेमाल किए गए एक्रिलामाइड मोनोमर और एन, एन-मेथिलीनबिसैक्रिलामाइड (मेथिलीनएक्रिलामाइड) क्रॉसलिंकिंग एजेंट की सांद्रता के अनुसार विभिन्न आकारों के प्रोटीन को अलग करता है।
यह किट PAGE जेल की त्वरित तैयारी के लिए आवश्यक विभिन्न प्रकार के अभिकर्मक प्रदान करता है। उपयोगकर्ताओं को जेल तैयार करने के लिए केवल अपना स्वयं का जेल तैयारी उपकरण तैयार करने की आवश्यकता होती है, जो जेल तैयार करने की प्रक्रिया को बहुत सरल बनाता है। इस किट द्वारा तैयार जेल का उपयोग केवल PAGE जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए किया जा सकता है। यह विनिर्देश मिनी जेल के लगभग 125 टुकड़े (0.75 मिमी मोटी जेल द्वारा गणना) तैयार कर सकता है।
विशेष विवरण
| एसडीएस-पीएजीई संकेन्द्रित जेल सांद्रता | 4.2% |
| एसडीएस-पीएजीई पृथक्करण जेल सांद्रता | 15% |
| पृथक्करण सीमा (kDa) | 10-45 |
| जेल प्रणाली | Tris-ग्लाइसिन |
| एसडीएस-पीएजीई संकेन्द्रित जेल सांद्रता | 4.2% |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 20327ES62 (125 मिनी जैल) |
| 20327-ए | 15% - पृथक्करण जेल बफर | 250 एमएल |
| 20327-बी | 15% - पृथक्करण जेल समाधान | 250 एमएल |
| 20327-सी | 15% - रंग सांद्रित जेल बफर | 80 एमएल |
| 20327-डी | 15% - सांद्रित जेल विलयन | 80 एमएल |
| 20327-ई | जेल कप तैयार करें | 3 |
शिपिंग और भंडारण
यह उत्पाद आइस पैक के साथ भेजा जाता है और इसे 2 से 3 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।℃~8℃ 1 वर्ष के लिए।
निर्देश: यह अनुशंसा की जाती है कि एक बार में जेल के बहुत अधिक टुकड़े न डालें, ताकि ऊपरी घोल को बहुत देर से डालने से बचा जा सके (अधिकतम 2-3 टुकड़े की अनुशंसा की जाती है)
1. लक्ष्य प्रोटीन के आणविक भार के अनुसार उपयुक्त जेल सांद्रता का चयन करें (तालिका 1 देखें)
2.जेल बनाने की प्रक्रिया (उदाहरण के लिए 0.75/1.0/1.5 मिमी मिनी जेल का एक टुकड़ा लें)
2.1 पृथक्करण जेल बफर और पृथक्करण जेल विलयन की समान मात्रा लें और उन्हें मिलाएं, अर्थात दोनों विलयनों की क्रमशः 2.0/2.7/4.0 एमएल मात्रा लें।
2.2 0.1 ग्राम अमोनियम परसल्फेट को तौलें और इसे 1 एमएल डीआयनाइज्ड पानी में घोलें। ग्राहक को अमोनियम परसल्फेट खुद खरीदना होगा।
2.3 चरण 1 में मिश्रित घोल में 35/45/70 μL APS डालें (यदि ठोसीकरण बहुत तेज हो तो प्रयुक्त APS की मात्रा आधी की जा सकती है) और पूरी तरह मिलाएं।
2.4 चरण 2 में घोल को जेल बनाने वाली कांच की प्लेट में इंजेक्ट करें। ध्यान दें कि पृथक्करण जेल को जोड़ने के 2 मिनट के भीतर सांद्रित जेल को जेल मोल्ड में इंजेक्ट किया जाना चाहिए, और सांद्रित जेल और पृथक्करण जेल के मिश्रण को रोकने के लिए सांद्रित जेल को डालना धीमा होना चाहिए। यदि व्यक्ति को इसे कॉन्फ़िगर करना मुश्किल लगता है, तो इसे इथेनॉल के साथ सील करने के बाद सांद्रित जेल को कॉन्फ़िगर करने के लिए भी अनुकूलित किया जा सकता है।
2.5 सांद्रित जेल की तैयारी: सांद्रित जेल बफर और सांद्रित जेल विलयन की समान मात्रा लें, अर्थात दोनों विलयनों का क्रमशः 0.5/0.75/1.0 mL लें, और फिर 10/13/18 μL APS मिलाएं और अच्छी तरह मिलाएं।
2.6 इसे जेल बनाने वाली कांच की प्लेट में इंजेक्ट करें और कंघी के दांतों को डालें (कंघी के दांतों को धीरे से डालने के लिए अत्यधिक बल का प्रयोग न करें)।
2.7 15 मिनट तक सांद्रित जेल जमने के बाद, कंघी के दांतों को हटाया जा सकता है और वैद्युतकणसंचलन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। नोट: कृपया ताज़ा तैयार वैद्युतकणसंचलन बफर का उपयोग करने का प्रयास करें।
नोट्स
1. यह सुझाव दिया जाता है कि वैद्युतकणसंचलन के दौरान वोल्टेज 100-120 V के बीच होना चाहिए। यदि वैद्युतकणसंचलन की गति को तेज करना आवश्यक है, तो इसे 150 V तक बढ़ाया जा सकता है।
2. जेल भरने से पहले, जेल के घोल को कमरे के तापमान पर संतुलित करना सुनिश्चित करें (उदाहरण के लिए, इसे कई मिनट तक रखें) ताकि जेल में बुलबुले बनने से प्रभावी रूप से बचा जा सके।
3. ग्राहक को अमोनियम परसल्फेट खुद खरीदना होगा। हम सिग्मा से कैट#A3678 के साथ उत्पाद का उपयोग करने की सलाह देते हैं।
4. अमोनियम परसल्फेट घोल की मात्रा केवल संदर्भ के लिए है, और वास्तविक मात्रा को व्यक्तिगत प्रयोगात्मक आदतों और अनुभव के अनुसार बढ़ाया या घटाया जा सकता है। अधिक अमोनियम परसल्फेट जोड़ने से जेल की गति तेज हो सकती है, और इसके विपरीत। PAGE जेल की जमावट दर तापमान और अमोनियम परसल्फेट की मात्रा से निकटता से संबंधित है।
5. इस उत्पाद में उचित मात्रा में TEMED विकल्प मिलाए गए हैं। यदि जेल की गति को और तेज़ करना आवश्यक हो, तो डिस्पेंसिंग से पहले आवश्यकतानुसार TEMED की उचित मात्रा मिलाई जा सकती है।
6. जेल जमने और तापमान के बीच एक महत्वपूर्ण सकारात्मक संबंध है। समान परिस्थितियों में, तापमान जितना अधिक होगा, जमने की गति उतनी ही तेज़ होगी।
7.रंग केंद्रित जेल भंडारण के दौरान थोड़ी मात्रा में अवक्षेपण उत्पन्न कर सकता है, जो एक सामान्य घटना है। कृपया इसका उपयोग करने में संकोच न करें।
8. एपीएस को -20 पर संग्रहित किया गया था℃सुविधा के लिए, जो APS खोला गया है और उपयोग में है उसे 4 पर संग्रहीत किया जा सकता है℃.
9. कृपया अपने स्वास्थ्य और सुरक्षा को सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक पीपीई, जैसे लैब कोट और दस्ताने पहनें।!
10. केवल अनुसंधान हेतु उपयोग हेतु!
तालिका नंबर एक विभिन्न सांद्रता के साथ एसडीएस-पीएजीई जेल की संदर्भ पृथक्करण सीमा
| एसडीएस-पीएजीई जेल सांद्रता | पृथक्करण सीमा (kDa) |
| 8% | 30-200 |
| 10% | 20-80 |
| 12.5% | 15-60 |
| 15% | 10-45 |
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