विवरण
डबल-स्ट्रैंडेड आरएनए (डीएसआरएनए) एमआरएनए के इन विट्रो ट्रांसक्रिप्शन के दौरान एक उप-उत्पाद के रूप में उभरता है। इस उप-उत्पाद में मानव शरीर के भीतर प्रतिरक्षात्मक गुण होते हैं, जो प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को उत्तेजित करने में सक्षम होते हैं, जिसके परिणामस्वरूप एमआरएनए का स्तर कम हो जाता है। यह डीएसआरएनए को एक परेशानी वाली प्रक्रिया अशुद्धता बनाता है जिसके लिए पूरी तरह से उन्मूलन और इसके अवशिष्ट उपस्थिति पर सख्त नियंत्रण की आवश्यकता होती है।
इस चिंता का समाधान करने के लिए, डबल-स्ट्रैंडेड आरएनए (डीएसआरएनए) एलिसा डिटेक्शन किट, अवशिष्ट डीएसआरएनए के परिमाणीकरण के लिए डबल-एंटीबॉडी सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे (एलिसा) के प्रायोगिक सिद्धांतों को काम में लाता है। किट का उपयोग न केवल नियमित dsRNAs का पता लगाने में किया जा सकता है, बल्कि peudo UTP, N1-Me-peudo UTP का पता लगाने में भी किया जा सकता है और 5-ओएमई-यूटीपी संशोधित डीएसआरएनए।
इस प्रक्रिया में एक एंजाइम प्लेट (जिसे 36717-A के रूप में नामित किया गया है) पर एक मानक और परीक्षण नमूना दोनों को जोड़ना शामिल है, जो पहले एंटी-डीएसआरएनए एंटीबॉडी के साथ लेपित है। इसके बाद, बायोटिन-लेबल वाले डीएसआरएनए डिटेक्शन एंटीबॉडी (36717-एफ) को पतला रूप में जोड़ा जाता है। अंत में, एंटीबॉडी, एंटीजन, बायोटिन और एसए-एचआरपी से युक्त एक कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए स्ट्रेप्टाविडिन-एचआरपी (एसए-एचआरपी) (36717-जी) पेश किया जाता है।
प्लेट धोने के बाद, TMB क्रोमोजेनिक घोल (36717-K) मिलाने से रंग का विकास शुरू होता है। HRP एंजाइम उत्प्रेरक के प्रभाव में, TMB रंगहीन से नीले रंग में बदल जाता है, जिसे स्टॉप सॉल्यूशन (36717-L) के अनुप्रयोग के माध्यम से रोक दिया जाता है। अंततः, इस परिवर्तन के परिणामस्वरूप एक पीला रंग बनता है, जिसकी तीव्रता नमूने में पहचाने गए dsRNA की मात्रा के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबंधित होती है।
यह किट बहुमुखी उद्देश्य की पूर्ति करती है, जिससे जैविक उत्पाद शुद्धिकरण प्रक्रिया का अनुकूलन, मध्यवर्ती चरणों के दौरान अशुद्धता नियंत्रण, तथा अंतिम उत्पाद मूल्यांकन के लिए रिलीज परीक्षण संभव हो पाता है।
पीउत्पाद वीअलिडेशन प्रतिवेदन
अवयव
| नहीं। | नाम | 36717ES48 | 36717ES96 |
| 36717-ए | एंटी-डीएसआरएनए लेपित माइक्रोटिटर स्ट्रिप्स | 48 टी | 96 टी |
| 36717-बी | एसटीडी 1: असंशोधित, 5 एनजी/μL | 7.5 μएल | 15 μएल |
| 36717-सी | STD 2: pUTP संशोधित, 5 ng/μL | 7.5 μएल | 15 μएल |
| 36717-डी | STD 3: N1-Me-pUTP संशोधित, 5 ng/μL | 7.5 μएल | 15 μएल |
| 36717-ई | STD 4: 5-OMe-UTP संशोधित, 5 ng/μL | 7.5 μएल | 15 μएल |
| 36717-एफ | खोज एंटीबॉडी: बायोटिन-संयुग्मित एंटीबॉडी (100x) | 60 μएल | 120 μएल |
| 36717-जी | स्ट्रेप्टाविडिन-एचआरपी (100x) | 60 μएल | 120 μएल |
| 36717-एच | तनुकरण बफर 1 | 25 एमएल | 50 एमएल |
| 36717-आई | तनुकरण बफर 2 | 15 एमएल | 30 एमएल |
| 36717-जे | वॉश बफर कंसन्ट्रेट（20×) | 20 एमएल | 40 एमएल |
| 36717-के | टीएमबी सब्सट्रेट | 6 एमएल | 12 एमएल |
| 36717-एल | समाधान रोकें | 3 एमएल | 6 एमएल |
| 36717-एम | प्लेट सीलर | 2 | 4 |
शिपिंग और भंडारण
किट को आइस पैक के साथ भेजा जाता है और इसे 2°C ~8°C पर संग्रहीत किया जा सकता है। बिना खोले उत्पाद एक वर्ष के लिए वैध है। एक बार अभिकर्मक खुलने के बाद, यह आधे साल के लिए वैध है। इस उत्पाद को कभी भी फ़्रीज़ न करें।
निर्देश
1. प्रयोग से पहले की तैयारी
1) प्रयोगात्मक सामग्री जो इस किट में उपलब्ध नहीं है लेकिन प्रयोग के लिए आवश्यक है:
क. आरएनज़-मुक्त युक्तियाँ;
ख. आरएनेज-मुक्त सेंट्रीफ्यूज ट्यूब;
ग. धूल रहित कागज;
डी. आरएनज़-मुक्त नमूना पूर्व उपचार प्लेट;
ई. विआयनीकृत जल या दोहरा आसुत जल।
2) आवश्यक लेकिन उपलब्ध नहीं कराए गए उपकरण और उपकरण:
क. बहुक्रियाशील माइक्रोप्लेट रीडर (दोहरी तरंगदैर्घ्य पहचान मोड सहित, 450nm और 650nm को कवर करता है; पहचान तरंगदैर्घ्य के रूप में 450nm और संदर्भ तरंगदैर्घ्य के रूप में 650nm का उपयोग करने में सक्षम);
ख. पूर्णतः स्वचालित प्लेट वॉशर, वोर्टेक्स मिक्सर, स्थिर तापमान मिक्सर, सेंट्रीफ्यूज;
सी. विभिन्न विशिष्टताओं के सटीक माइक्रोपिपेट और मल्टी-चैनल माइक्रोपिपेट;
डी. टाइमर, 4℃ रेफ्रिजरेटर;
ई. माइक्रोप्लेट शेकर.
2. परिणाम विश्लेषण
क. यदि परीक्षण किए जाने वाले नमूने का OD मान मानक वक्र के उच्चतम बिंदु पर OD मान से अधिक है, तो नमूने को पतला करके पुनः मापने की आवश्यकता है।
बी. वक्र विकास प्रक्रिया: x-अक्ष पर मानक सांद्रता और y-अक्ष पर संगत अंशांकित मानक अवशोषण मानों को प्लॉट करके एक मानक वक्र बनाएँ। विभिन्न ड्राइंग और सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर उपकरण मानक वक्रों के निर्माण और अज्ञात नमूना सांद्रता के निर्धारण में सहायता कर सकते हैं। इस प्रयोग के लिए चार-पैरामीटर या पाँच-पैरामीटर फिटिंग विधि का उपयोग करना उचित है।अंततः, मानक वक्र का संदर्भ लेकर और नमूने के कमजोरीकरण कारक पर विचार करके नमूने में dsRNA की अवशिष्ट मात्रा की गणना करें।
सी. प्रदान किया गया मानक वक्र एक उदाहरण है (केवल संदर्भ उद्देश्यों के लिए)। वास्तविक नमूना सामग्री को उसी प्रयोगात्मक मानक के लिए विशेष रूप से तैयार किए गए मानक वक्र का उपयोग करके निर्धारित किया जाना चाहिए।
3. प्रयोग प्रवाह चार्ट
चित्र 5 प्रयोग प्रवाह चार्ट
4. उत्पाद प्रदर्शन
इस किट के प्रदर्शन का पूरी तरह से मूल्यांकन किया गया है। विवरण के लिए, कृपया संबंधित प्रदर्शन सत्यापन रिपोर्ट प्राप्त करने के लिए तकनीकी कर्मियों से संपर्क करें।
5. नोट्स
- कृपया इस किट का उपयोग करने से पहले इस अनुदेश पुस्तिका को ध्यानपूर्वक पढ़ें।
- कृपया इस उत्पाद का उपयोग वैधता अवधि के भीतर करें, और विभिन्न बैचों से संबंधित अभिकर्मकों को मिश्रित करना निषिद्ध है।
- उपयोग से पहले सभी अभिकर्मकों को कमरे के तापमान पर वापस लाना आवश्यक है।
- अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए कृपया लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
- यह उत्पाद केवल वैज्ञानिक अनुसंधान प्रयोजनों के लिए है।
भुगतान और सुरक्षा
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जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
कुछ अनुप्रयोगों के लिए अतिरिक्त तृतीय-पक्ष बौद्धिक संपदा अधिकारों की आवश्यकता हो सकती है।
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