पॉलीब्रीन (हेक्साडीमेथरिन ब्रोमाइड), जिसे पॉलीब्रीन के नाम से भी जाना जाता है, एक धनायनिक बहुलक है जिसका उपयोग आमतौर पर स्तनधारी कोशिकाओं के साथ डीएनए ट्रांसफ़ेक्शन प्रयोगों में लिपोसोम की ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता को बढ़ाने के लिए किया जाता है। यह रेट्रोवायरस-मध्यस्थ जीन ट्रांसफ़ेक्शन और लेंटिवायरस-मध्यस्थ जीन ट्रांसफ़ेक्शन में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। क्रिया के तंत्र में कोशिका की सतह पर सियालिक एसिड को बेअसर करना, वायरस कणों के साथ इलेक्ट्रोस्टैटिक प्रतिकर्षण पर काबू पाकर सोखना की सुविधा प्रदान करना शामिल हो सकता है। पॉलीब्रीन को एक एंटीकोगुलेंट (हेपरिन विरोधी) के रूप में भी जाना जाता है और इसका उपयोग अक्सर गैर-विशिष्ट रूप से एकत्रित लाल रक्त कोशिकाओं के उत्पादन में किया जाता है। इसके अतिरिक्त, प्रोटीन अनुक्रमण में, पॉलीब्रीन की कम खुराक को स्वचालित अनुक्रमण विश्लेषण में पेप्टाइड्स के क्षरण में उल्लेखनीय रूप से सुधार करने के लिए दिखाया गया है। PVDF झिल्लियों में पॉलीब्रीन को जोड़ने से झिल्ली आत्मीयता भी बढ़ सकती है।

विनिर्देश

उत्पाद को घोल के रूप में प्रदान किया जाता है, और पाउडर को 0.9% NaCl में पुनर्गठित करके 10 mg/mL घोल बनाया जाता है, जिसे फिर 0.22 μm फ़िल्टर का उपयोग करके निष्फल किया जाता है। इसे आमतौर पर उपयोग के लिए 1:1000-1:2000 के अनुपात में पतला किया जाता है, जिसमें सेल के प्रकार के आधार पर विशिष्ट पतलापन अनुपात होता है, जैसा कि प्रासंगिक साहित्य में उल्लिखित है।

शिपिंग और भंडारण

परिवहन और भंडारण की सलाह -20 डिग्री सेल्सियस पर दी जाती है, जिसकी शेल्फ लाइफ 2 साल होती है। बार-बार जमने-पिघलने के चक्र से बचने के लिए इसे अलग-अलग हिस्सों में बांटकर स्टोर करने की सलाह दी जाती है।

सावधानियां:

1. सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए प्रयोगशाला पोशाक और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।

2. यह उत्पाद केवल अनुसंधान प्रयोजनों के लिए है।

परिचालनात्मक चरण

(संदर्भ के लिए, विशिष्ट सांद्रता भिन्न हो सकती है, प्रासंगिक साहित्य देखें):

नोट: पॉलीब्रीन कुछ कोशिकाओं (जैसे टर्मिनली विभेदित न्यूरॉन्स, डीसी कोशिकाएं) के लिए महत्वपूर्ण विषाक्तता प्रदर्शित कर सकता है, और प्रारंभिक उपयोग के लिए विषाक्तता परीक्षण की सिफारिश की जाती है।

प्रयोग 1: रेट्रोवायरल संक्रमण

1. पुनः संयोजक रेट्रोवायरस स्टॉक की तैयारी: 5 एमएल ग्रोथ मीडियम (5% सीरम) के साथ 100 मिमी डिश में ट्रांसफ़ेक्शन रेट्रोवायरस पैकेजिंग कोशिकाओं की एक मोनोलेयर युक्त कल्चर सेल। 24 घंटे के बाद, कल्चर मीडियम को हटा दें और इसे 0.45 μm फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर करें।

2. संक्रमण के लिए कोशिकाओं का संवर्धन: एक 100 मिमी डिश में, 5× 100 मिमी सेल घनत्व के साथ 10 एमएल पूर्ण विकास माध्यम जोड़ें।10⁵ प्रति डिश.

3. वायरस संक्रमण: सेल कल्चर के 24 घंटे बाद, पूरा कल्चर माध्यम हटा दें। कोशिकाओं को पॉलीब्रीन युक्त 2 एमएल वायरस सुपरनैटेंट (अंतिम सांद्रता: 5-10 μg/mL) से 37°C पर 3-6 घंटे तक संक्रमित करें।

4. वायरस कण एकत्र करें: 8 एमएल पूर्ण वृद्धि माध्यम जोड़ें। 2-3 दिनों के संवर्धन के बाद, वायरस कण प्राप्त करने के लिए संवर्धन माध्यम एकत्र करें।

प्रयोग 2: ट्रांसफ़ेक्शन

1. लगभग 50% कोशिका घनत्व वाले पूर्ण वृद्धि माध्यम में कोशिकाओं का संवर्धन करें।

2. सेल कल्चर के 18-24 घंटे बाद, डीएनए-ग्रोथ मीडियम-पॉलीब्रीन मिश्रण तैयार करें। पूरा ग्रोथ मीडियम (60 मिमी डिश के लिए 2 एमएल, 100 मिमी डिश के लिए 3 एमएल) डालें और 37 डिग्री सेल्सियस पर प्रीहीट करें। 10 एनजी ~ 10 µg प्लास्मिड को धीरे से मिलाएं। पॉलीब्रीन को 5-10 μg/mL की अंतिम सांद्रता में मिलाएँ। धीरे से मिलाएँ। प्रत्येक घटक को निर्दिष्ट क्रम में जोड़ा जाना चाहिए।

3. कल्चर मीडियम को हटा दें और कोशिकाओं में डीएनए-ग्रोथ मीडियम-पॉलीब्रीन घोल डालें, जो 37 डिग्री सेल्सियस पर 6-20 घंटे के लिए रखा जाता है। सेल कल्चर के पहले 6 घंटों के दौरान हर 1.5 घंटे में धीरे-धीरे मिलाएँ।

4. डीएनए-ग्रोथ मीडियम-पॉलीब्रीन घोल निकालें। कोशिकाओं को डीएमएसओ शॉक घोल (1× HBSS में 15% डीएमएसओ) से ढकें।हर बार घोल डालते समय कल्चर डिश को 10 सेकंड के लिए धीरे से हिलाएं ताकि समान वितरण सुनिश्चित हो सके। कोशिकाओं को 4 मिनट के लिए 37°C पर इनक्यूबेट करें।

5. DMSO शॉक सॉल्यूशन को तुरंत हटा दें और कोशिकाओं को दो बार पूरे ग्रोथ मीडियम से धीरे से धोएँ। 60 मिमी डिश के लिए, हर बार 5 एमएल कल्चर मीडियम से धोएँ, और 100 मिमी डिश के लिए, हर बार 10 एमएल कल्चर मीडियम से धोएँ।

6. कोशिकाओं में पूर्ण वृद्धि माध्यम डालें।

7. प्रोटीन अभिव्यक्ति: संवर्धन के 24-72 घंटे बाद, आवश्यकतानुसार प्रोटीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए कोशिकाओं को एकत्रित करें।

कोशिका चयन: संवर्धन के 24-72 घंटों के बाद, कोशिका की स्थिति के आधार पर, ताजा चयन माध्यम पर स्विच करें और कोशिका चयन जारी रखें।