विवरण
Hieff Trans™ इन विट्रो siRNA/miRNA ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट एक PEI कैटायनिक, एम्फीफिलिक ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट है जिसे स्तनधारी कोशिकाओं में siRNA के ट्रांसफ़ेक्शन के लिए विकसित किया गया है। siRNA और miRNA के ट्रांसफ़ेक्शन के लिए उपयुक्त। यह ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट siRNA या miRNA को एक कैटायनिक कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए एनकैप्सुलेट करता है, जो सेल की सतह पर नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए प्रोटियोग्लाइकन के साथ इंटरैक्ट करता है और सेल की सतह पर सोख लेता है, एंडोसाइटोसिस के माध्यम से सेल में प्रवेश करता है, और एक समावेशन निकाय बनाता है। ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट एक प्रोटॉन स्पंज के रूप में कार्य करता है, जो H को अवशोषित कर सकता है+ लाइसोसोम में, तथा प्रोटॉनों के निरंतर प्रवाह के कारण परिसर फूल जाता है और फट जाता है, जिसके परिणामस्वरूप बहिर्जात siRNA या miRNA कोशिकाद्रव्य में मुक्त हो जाते हैं।
यह उत्पाद सेल लाइनों की एक विस्तृत श्रृंखला में 1 nM siRNA की 90% से अधिक अभिव्यक्ति दक्षता प्राप्त कर सकता है, जिससे ऑफ-टारगेट प्रभाव से बचा जा सकता है। हेला, MCF-7, HepG2, CHO, और अन्य अनुयाई कोशिकाओं सहित विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के संक्रमण के लिए उपयुक्त; और K562 या THP-1 कोशिकाओं जैसे निलंबन सेल लाइनों को संक्रमित करना मुश्किल है, 80% साइलेंसिंग दक्षता प्राप्त कर सकते हैं; कुछ प्राथमिक कोशिकाओं, प्राथमिक मानव फाइब्रोब्लास्ट और प्राथमिक मानव हेपेटोसाइट्स आदि सहित, 80% की साइलेंसिंग दक्षता प्राप्त की जा सकती है।
विशेषता
- कम विषाक्तता: संक्रमित कोशिकाएं अभी भी अच्छी सक्रियता बनाए रखती हैं।
- व्यापक अनुकूलनशीलता: साधारण कोशिकाएं और प्राथमिक कोशिकाएं, जिनका संक्रमण करना कठिन होता है, पूर्ण रूप से कवर की जाती हैं।
आवेदन
- कोशिका संक्रमण
विनिर्देश
| भौतिक एवं रासायनिक गुण | जानकारी |
| रूप | तरल |
| सीरम संगत | हाँ |
| सेल प्रकार | स्थापित सेल लाइनें |
| नमूना प्रकार | siRNA/miRNA |
| ट्रांसफेक्शन तकनीक | पीईआई-आधारित ट्रांसफ़ेक्शन |
अवयव
| घटक सं. | नाम | 40806ES01 | 40821ES02 | 40821ES03 |
| 40806 | हाईफ़ ट्रांस™ कृत्रिम परिवेशीय siRNA/miRNA ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक | 0.1 एमएल | 0.5 एमएल | 1 एमएल |
भंडारण
उत्पाद को एक वर्ष के लिए 2-8ºC पर संग्रहित किया जाना चाहिए। फ्रीज न करें!
आंकड़ों
- ट्रांसफेक्शन प्रभाव का प्रदर्शन
चित्र 1. इन विट्रो siRNA/miRNA ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक में Hieff Trans™ की ट्रांसफ़ेक्शन दक्षता ऊपर दर्शाई गई है।
(1) प्रश्न: डीएनए ट्रांसफ़ेक्शन और siRNA ट्रांसफ़ेक्शन के बीच क्या अंतर है?
उत्तर: 1. चूंकि इसमें केवल 20 आधार युग्म होते हैं, इसलिए siRNA हजारों या 10,000 से भी अधिक आधार युग्मों वाले DNA से बहुत छोटा होता है।
2. DNA को ट्रांसफ़ेक्ट करने के लिए उपयोग किए जाने वाले ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक और विधियाँ siRNA के ट्रांसफ़ेक्शन के लिए उपयुक्त नहीं हैं।
3. siRNA अभिकर्मक में DNA अभिकर्मक की तुलना में अभिकर्मक अभिकर्मकों की साइटोटॉक्सिसिटी के संबंध में अधिक कठोर आवश्यकताएं होती हैं।
(2) प्रश्न: क्या ट्रांसफ़ेक्शन के बाद ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक को बदलने की आवश्यकता है?
उत्तर: माध्यम परिवर्तन के लिए दो स्थितियाँ विभेदित की जा सकती हैं:
1. यदि ट्रांसफ़ेक्शन से पहले कोई माध्यम परिवर्तन नहीं किया गया है, तो कोशिका वृद्धि के लिए आवश्यक पोषक तत्वों को सुनिश्चित करने के लिए ट्रांसफ़ेक्शन के लगभग 6 घंटे बाद माध्यम को बदल दिया जाना चाहिए;
2. यदि अभिकर्मक से पहले कोई परिवर्तन होता है तो माध्यम को हमेशा की तरह बदला जा सकता है, जब माध्यम में पोषक तत्वों की कमी हो।
(3) प्रश्न: siRNA और प्लास्मिड को ट्रांसफ़ेक्ट करने के लिए PEI ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मक की दक्षता क्या है?
उत्तर: यह PEI अभिकर्मक अभिकर्मक विशेष रूप से siRNA के लिए विकसित किया गया है, और प्लाज्मिड अभिकर्मक की अनुशंसा नहीं की जाती है।
(4) प्रश्न: क्या अभिकर्मक अभिकर्मक को जमाया जा सकता है?
उत्तर: इसे फ्रीज न करें, क्योंकि ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक एक PEI कैटायनिक ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक है। कम तापमान पर फ्रीज करने से PEI ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक की गतिविधि नष्ट हो जाएगी। इसलिए, सर्वोत्तम ट्रांसफेक्शन दक्षता बनाए रखने के लिए इसे 4 डिग्री पर स्टोर करना सबसे अच्छा है।
(5) प्रश्न: अभिकर्मक दक्षता में सुधार कैसे करें?
A: a: ट्रांसफ़ेक्शन के समय कोशिकाओं का घनत्व, 30%-50%।
b: ट्रांसफ़ेक्शन के दौरान siRNA और लाइपोसोम कमजोरीकरण के लिए ऑप्टी-एमईएम सीरम-मुक्त माध्यम का उपयोग किया जाना चाहिए।
c: अभिकर्मन के 4-6 घंटे बाद माध्यम को बदला जा सकता है।
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