विवरण
वेरो मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट का उपयोग विभिन्न जैविक उत्पादों के मध्यवर्ती नमूनों, अर्द्ध-तैयार और तैयार उत्पादों में वेरो मेजबान कोशिका डीएनए अवशेषों के मात्रात्मक विश्लेषण के लिए किया जाता है।
यह किट टैकमैन फ्लोरोसेंट जांच और पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) विधि को अपनाती है, जिसमें एफजी स्तर न्यूनतम पहचान सीमा होती है और यह विशेष रूप से और जल्दी से अवशिष्ट वेरो सेल डीएनए का पता लगा सकती है। किट को अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट (कैट # 18461ES) के साथ उपयोग करने की आवश्यकता है।
उत्पाद अवयव
| नहीं। | नाम | 41307ईएस50 | 41307ईएस60 |
| 41307-ए | वेरो qPCR मिक्स | 0.75 एमएल | 1.5 एमएल |
| 41307-बी | वेरो प्राइमर और प्रोब मिक्स | 200 μएल | 400 μएल |
| 41307-सी | डीएनए कमजोरीकरण बफर | 1.8 एमएल×2 | 1.8 एमएल×4 |
| 41307-डी | वेरो डीएनए नियंत्रण (30 एनजी/μL) | 25 μएल | 50 μएल |
| 41307-ई | मैं सी* | 50 μएल | 100 μएल |
*आईसी: आंतरिक नियंत्रण
शिपिंग और भंडारण
1. सूखी बर्फ पर भेजा गया और -20°C पर संग्रहीत किया जाता है 2 के लिए वर्ष
2. माल प्राप्त करने के बाद, कृपया उन्हें तुरंत जांच लें और संबंधित भंडारण तापमान में स्टोर करें।
चेतावनी
1. कृपया इस अभिकर्मक का उपयोग करने से पहले इस मैनुअल को ध्यानपूर्वक पढ़ें, और प्रयोग मानकीकृत होना चाहिए, जिसमें नमूना हैंडलिंग, प्रतिक्रिया प्रणाली की तैयारी और नमूना जोड़ना शामिल है।
2. नमूने डालना और घोल तैयार करना बर्फ पर सबसे अच्छा किया जाता है।
3. उपयोग से पहले यह सुनिश्चित करें कि प्रत्येक घटक पूरी तरह से घूम गया है और कम गति पर सेंट्रीफ्यूज किया गया है।
4. अपनी सुरक्षा और स्वास्थ्य के लिए, कृपया ऑपरेशन के समय लैब कोट और डिस्पोजेबल दस्ताने पहनें।
5. यह प्रॉडक्ट केवल शोध के उपयोग के लिए है!
लागू उपकरण मॉडल
इसमें शामिल हैं लेकिन इन्हीं तक सीमित नहीं:
बायो-रेड: सीएफएक्स96 ऑप्टिक मॉड्यूल.
थर्मो साइंटिफिक: एबीआई 7500; एबीआई क्वांट स्टूडियो 5; अबी स्टेप वनप्लस.
उपयोग निर्देश
1. वेरो डीएनए मानक कमजोरीकरण और मानक वक्र तैयारी
वेरो किट में उपलब्ध डीएनए डाइल्यूशन बफर का उपयोग करके डीएनए कंट्रोल को ग्रेडिएंट रूप से पतला किया गया, और कमजोरीकरण सांद्रता 300 pg/μL, 30 pg/μL, 3 pg/μL, 300 fg/μL, 30 fg/μL, 3 है एफजी/μएल.
नीचे विस्तृत निर्देश देखें:
1.1 पिघलाना वेरो बर्फ पर डीएनए नियंत्रण और डीएनए कमजोरीकरण बफर। पूरी तरह से पिघलने के बाद, मिश्रण को धीरे से घुमाएं, और 10 सेकंड के लिए कम गति पर सेंट्रीफ्यूज करें।
1.2 छक्का निकालो साफ 1.5 एमएल ट्यूब, 3 एनजी/μL, ①, ②, ③, ④, ⑤, ⑥ के साथ चिह्नित।
1.3 90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर और 10 μL वेरो जोड़ें डीएनए नियंत्रण 1 को ।5 एमएल माइक्रोफ्यूज ट्यूब पर 3 एनजी/μL लेबल लगाएं और पतला करें 3 एनजी/μL. मिक्स करें और फिर 10 सेकंड के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। पतला डीएनए मानक को सबपैकेज करें और इसे अल्पावधि (3 महीने से अधिक नहीं) में -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है। कृपया बार-बार फ्रीज-पिघलने से बचें।
1.4 अन्य में 90 μL डीएनए कमजोर पड़ने वाला बफर जोड़ें ट्यूबों, फिर सीरियल कमजोर पड़ने के लिए नीचे दी गई प्रक्रिया का पालन करें।
| नली | पतला करने की क्रिया अनुपात | मानक सांद्रता |
| ① | 10 μL 3 ng/μL+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 300 पीजी/μएल |
| ② | 10 μL ①+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 30 पीजी/μएल |
| ③ | 10 μL ②+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 3 पीजी/μएल |
| ④ | 10 μL ③+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 300 एफजी/μएल |
| ⑤ | 10 μL ④+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 30 एफजी/μएल |
| ⑥ | 10 μL ⑤+90 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर | 3 एफजी/μएल |
[नोट्स]:
1. प्रत्येक सांद्रता के लिए तीन प्रतिकृति कुओं की आवश्यकता होती है। पता लगाने की सीमा 3 है एफजी/μएल-300पीजी/μएल और यदि आवश्यक हो तो इस सीमा को बढ़ाया जा सकता है।
2. बार-बार जमने-पिघलने की घटनाओं को कम करने और संदूषण से बचने के लिए, डीएनए नियंत्रण को संग्रहीत करने की सिफारिश की जाती है पहली बार -80°C पर अंशों में।
3. एक बार पिघलने के बाद, डीएनए कमजोरीकरण बफर 2-8°C पर संग्रहित किया जाना चाहिए 7 दिनों के लिए, यदि लंबे समय तक उपयोग नहीं किया जाता है, तो कृपया -20 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
4. सुनिश्चित करें कि टेम्पलेट पूरी तरह से मिश्रित हो गया है, मिश्रण को 15 सेकंड से 1 मिनट तक धीरे से हिलाएं प्रत्येक ढाल कमजोर पड़ने के लिए.
2. निष्कर्षण पुनर्प्राप्ति नियंत्रण (ERC) तैयारी
एकाग्रता निर्धारित करें वेरो का ईआरसी में डीएनए आवश्यकतानुसार (ईआरसी नमूना) उदाहरण के तौर पर 3 पीजी/μएल डीएनए के साथ तैयार किया गया था), इस प्रकार:
2.1 एक साफ 1.5 एमएल ट्यूब में 100 μL परीक्षण नमूना डालें, फिर 10 μL 3pg/μL वेरो डालें डीएनए मानक (③) और अच्छी तरह से मिलाएं, ईआरसी के रूप में चिह्नित।
2.2 ईआरसी नमूने का डीएनए निष्कर्षण करें शुद्ध ईआरसी तैयार करने के लिए परीक्षण नमूनों के साथ नमूना।
3. सकारात्मक नियंत्रण नमूना (पीसीएस) तैयार करना (वैकल्पिक)
एकाग्रता निर्धारित करें वेरो का पीसीएस में डीएनए आवश्यकतानुसार (पीसीएस) उदाहरण के तौर पर 3 पीजी/μL डीएनए के साथ तैयार किया गया था), इस प्रकार:
3.1 100 μL 3 pg/μL वेरो मिलाएं डीएनए मानक (③) एक साफ 1.5 एमएल ट्यूब में डालें, फिर पीसीएस के रूप में चिह्नित करें।
3.2 पीसीएस का डीएनए निष्कर्षण करें शुद्ध पीसीएस तैयार करने के लिए परीक्षण नमूनों के साथ।
4. नकारात्मक नियंत्रण समाधान (एनसीएस) की तैयारी
प्रयोग में नकारात्मक नियंत्रण सेट करें, विशिष्ट संचालन चरण निम्नानुसार हैं:
4.1 100 μL जोड़ें नमूना मैट्रिक्स (या डीएनए कमजोर बफर) को एक साफ 1.5 एमएल ट्यूब में डालें, फिर एनसीएस के रूप में चिह्नित करें।
4.2 शुद्ध एन.सी.एस. नमूना तैयार करने के लिए परीक्षण नमूनों के साथ एन.सी.एस. नमूने का डी.एन.ए. निष्कर्षण करें।
5. कोई टेम्पलेट नियंत्रण (एनटीसी) तैयारी नहीं
कोई टेम्पलेट सेट न करें प्रयोग में नियंत्रण के लिए, विशिष्ट संचालन चरण निम्नानुसार हैं:
5.1 एनटीसी को नमूने के पूर्व उपचार की आवश्यकता नहीं होती है और इसे अवशिष्ट डीएनए सामग्री के qPCR पता लगाने के चरण में कॉन्फ़िगर किया जा सकता है।
5.2 प्रत्येक ट्यूब या कुएँ में एनटीसी नमूना 20 है μएल मिक्स (यानी 16 μएल वेरो qPCR मिश्रण + 4 μL वेरो प्राइमर और जांच मिश्रण) + 20 μL डीएनए कमजोरीकरण बफर। तीन प्रतिकृति कुओं को कॉन्फ़िगर करने की सिफारिश की जाती है।
6. पीसीआर प्रतिक्रिया प्रणाली
| अवयव | आयतन(μL) |
| वेरो क्यूपीसीआर मिश्रण | 16 |
| वेरो प्राइमर और जांच मिश्रण | 4 |
| डीएनए टेम्पलेट | 20 |
| कुल मात्रा | 40 |
[नोट्स]:
1. प्रतिक्रियाओं की संख्या से कुल PCR प्रतिक्रिया मात्रा की गणना करें: qPCR मिश्रण = (प्रतिक्रियाओं की संख्या + 2) × (16 + 4) μL (दो प्रतिक्रिया कुओं के नुकसान सहित)। प्रयोग में प्रत्येक नमूने के लिए तीन से अधिक प्रतिकृति की सिफारिश की जाती है।
2. ट्यूब को ढकने या प्लेट को सील करने के बाद, रिएक्शन ट्यूब या प्लेट को 10 सेकंड के लिए कम गति पर सेंट्रीफ्यूज करें। 5 सेकंड के लिए पर्याप्त हिलाने और मिश्रण करने के बाद, ढक्कन या दीवार से नीचे तक तरल इकट्ठा करने के लिए सेंट्रीफ्यूज को दोहराएं। ऑपरेशन के दौरान बुलबुले से बचें।
अनुशंसित प्लेट सेटअप के लिए नीचे दी गई तालिका देखें:
|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
| ए | एनटीसी |
| एसटीडी 1 | एसटीडी 1 | एसटीडी 1 |
| टीएस 1 | टीएस 1 | टीएस 1 |
| बी | एनटीसी |
| एसटीडी 2 | एसटीडी 2 | एसटीडी 2 |
| टीएस 2 | टीएस 2 | टीएस 2 |
| सी | एनटीसी |
| एसटीडी 3 | एसटीडी 3 | एसटीडी 3 |
| टीएस 3 | टीएस 3 | टीएस 3 |
| डी | एनसीएस |
| एसटीडी 4 | एसटीडी 4 | एसटीडी 4 |
|
|
|
|
| इ | एनसीएस |
| एसटीडी 5 | एसटीडी 5 | एसटीडी 5 |
| ईआरसी 1 | ईआरसी 1 | ईआरसी 1 |
| एफ | एनसीएस |
| एसटीडी 6 | एसटीडी 6 | एसटीडी 6 |
| ईआरसी 2 | ईआरसी 2 | ईआरसी 2 |
| जी |
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|
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|
| ईआरसी 3 | ईआरसी 3 | ईआरसी 3 |
| एच |
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|
|
|
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| पीसी | पीसी | पीसी |
प्लेट लेआउट में शामिल हैं: 1 एनटीसी (संख्या खाका नियंत्रण), 1 एनसीएस (नकारात्मक नियंत्रण समाधान), 6 एसटीडी (6 का मानक वक्र) मानक सांद्रता), 3 टीएस (परीक्षण नमूने), 3 ईआरसी (निष्कर्षण पुनर्प्राप्ति नियंत्रण), 1 पीसीएस (सकारात्मक नियंत्रण नमूना)।प्रत्येक नमूने के लिए तीन प्रतिकृति कुएँ।
7. पीसीआर उपकरण के लिए सेटअप दिशानिर्देश (2-चरण विधि)
निम्नलिखित निर्देश केवल थर्मो एबीआई 7500 qPCR उपकरण पर लागू होते हैं (सॉफ़्टवेयर संस्करण 2.0)। यदि आप किसी भिन्न उपकरण का उपयोग करते हैं, तो सेटअप दिशानिर्देशों के लिए लागू उपकरण गाइड देखें।
7.1 एक नया प्रयोग उत्पन्न करें, पूर्ण परिमाणीकरण या उपयोगकर्ता-परिभाषित टेम्पलेट चुनें।
7.2 'परिभाषित करें' इंटरफ़ेस और 'लक्ष्य' फलक में, एक लक्ष्य जोड़ें और उसे FAM नाम दें, रिपोर्टर को 'FAM' और क्वेंचर को 'कोई नहीं' चुनें।
7.3 'सैंपल' पैन में, सभी सैंपल की जानकारी बारी-बारी से जोड़ें। फिर कुओं का चयन करें, लक्ष्य और सैंपल को तदनुसार चुनें। वेरो का कार्य निर्धारित करें डीएनए मानक को मानक के रूप में मान दें, और मान 300000, 30000, 3000, 300, 30, 3 निर्दिष्ट करें (प्रत्येक वेल में डीएनए सांद्रता की इकाई fg/μL है) को मात्रा कॉलम में दर्ज करें, और वेल को STD 1, STD 2, STD 3, STD 4, STD 5 नाम दें। STD 6, तदनुसार। NTC का कार्य NTC के रूप में सेट करें। NCS, TS, ERC सेट करें और पीसीएस अज्ञात के रूप में, और उन्हें उपरोक्त प्लेट लेआउट के अनुसार नाम दें। फिर अगला क्लिक करें।
7.4 प्रवर्धन कार्यक्रम सेट करें: प्रतिक्रिया मात्रा 40 μL के रूप में सेट करें।
| चक्र चरण | तापमान(℃) | समय | साइकिल |
| प्रारंभिक विकृतीकरण | 95 | 10 मिनिट | 1 |
| विकृतीकरण | 95 | 15 सेकंड | 40 |
| एनीलिंग/विस्तार （प्रतिदीप्ति संग्रह） | 60 | 30 सेकंड |
8. क्यूपीसीआर परिणामों का विश्लेषण
8.1 सिस्टम स्वचालित रूप से विश्लेषण के एम्पलीफिकेशन प्लॉट पैनल में थ्रेशोल्ड देगा। सिस्टम द्वारा दिया गया थ्रेशोल्ड कभी-कभी बेसलाइन के बहुत करीब होता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रतिकृति कुओं के बीच सीटी में बड़ा अंतर होता है। आप थ्रेशोल्ड को मैन्युअल रूप से उचित स्थिति में समायोजित कर सकते हैं और विश्लेषण पर क्लिक कर सकते हैं। फिर आप शुरू में जाँच कर सकते हैं कि मल्टीकंपोनेंट प्लॉट में एम्पलीफिकेशन कर्व सामान्य है या नहीं।
8.2 परिणाम विश्लेषण टैब में, मानक वक्र प्लॉट की समीक्षा करें। ढलान, Y-अवरोधन, R2 के मानों की पुष्टि करें और दक्षता। एक सामान्य मानक वक्र के लिए, R²>0.99; 90%≤Eff%≤110%।
8.3 में 'व्यू वेल टेबल' विश्लेषण में फलक, प्रत्येक नमूने की सांद्रता मात्रा में दिखाई जाती है, इकाई fg/μL है, इकाइयों को pg/μL में परिवर्तित किया जा सकता है या परख रिपोर्ट में पीजी/एमएल।
भुगतान और सुरक्षा
आपकी भुगतान जानकारी सुरक्षित रूप से संसाधित की जाती है। हम क्रेडिट कार्ड के विवरण को संग्रहीत नहीं करते हैं और न ही आपके क्रेडिट कार्ड की जानकारी तक पहुंच है।
जाँच करना
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उपवास
यह उत्पाद केवल शोध उद्देश्यों के लिए है और मनुष्यों या जानवरों में चिकित्सीय या नैदानिक उपयोग के लिए अभिप्रेत नहीं है। उत्पाद और सामग्री येसेन बायोटेक्नोलॉजी के स्वामित्व वाले पेटेंट, ट्रेडमार्क और कॉपीराइट द्वारा संरक्षित हैं। ट्रेडमार्क प्रतीक मूल देश को इंगित करते हैं, जरूरी नहीं कि सभी क्षेत्रों में पंजीकरण हो।
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