विवरण
हाइग्रोमाइसिन बी, स्ट्रेप्टोमाइसिस हाइग्रोस्कोपिकस द्वारा संश्लेषित एक एमिनोग्लाइकोसाइड एंटीबायोटिक है, जो 70S राइबोसोमल स्थानांतरण में हस्तक्षेप करके और mRNA टेम्पलेट को गलत तरीके से पढ़ने के द्वारा प्रोटीन संश्लेषण को रोकता है, इस प्रकार प्रोकैरियोट्स (जैसे बैक्टीरिया), यूकेरियोट्स (जैसे यीस्ट, कवक) और उच्च स्तनधारी यूकेरियोट्स को मार देता है।
एस्चेरिचिया कोली से प्राप्त हाइग्रोमाइसिन प्रतिरोध जीन (hyg या hph) हाइग्रोमाइसिन बी फॉस्फोट्रांसफेरेज़ को एनकोड करते हैं, जो हाइग्रोमाइसिन बी को एक गैर-जैविक रूप से सक्रिय फॉस्फोराइलेटेड उत्पाद में बदल देता है, जिससे यह प्रोकैरियोटिक या यूकेरियोटिक कोशिकाओं की स्क्रीनिंग और संवर्धन के लिए एक उत्कृष्ट चयनात्मक मार्कर बन जाता है, जो हाइट्रोमाइसिन प्रतिरोध जीन के साथ सफलतापूर्वक ट्रांसफ़ेक्ट होते हैं। इसके अलावा, अलग-अलग क्रियाविधि के कारण, हाइग्रोमाइसिन बी का उपयोग अक्सर दोहरे प्रतिरोधी सेल लाइनों के चयन के लिए G418 या ब्लास्टिसिडिन एस के साथ संयोजन में किया जाता है। हाइग्रोमाइसिन बी का उपयोग एंटीवायरल एजेंट के रूप में भी किया जा सकता है क्योंकि यह चुनिंदा रूप से वायरल संक्रमण के कारण बढ़ी हुई झिल्ली पारगम्यता वाली कोशिकाओं में प्रवेश करता है और अनुवाद को रोकता है। यह पशु आहार के साथ मिश्रित होने पर कीट-विकर्षक के रूप में भी कार्य कर सकता है।
यह उत्पाद एक जीवाणुरहित हाइग्रोमाइसिन बी घोल (पीबीएस बफर में 50 मिलीग्राम/एमएल) है और इसे संवर्धन माध्यम के साथ प्रयोग के लिए सीधे पतला किया जा सकता है।
विशेषताएँ
मानकीकृत उत्पादन, फैक्ट्री बड़े पैमाने पर उत्पादन मोड का उपयोग करना
अनुप्रयोग
बाँझ
स्थिर रूप से ट्रांसफ़ेक्टेड सेल लाइनों की स्क्रीनिंग
विशेष विवरण
| CAS संख्या। | 31282-04-9 |
| आणविक सूत्र | सी20एच37एन3हे13 |
| आणविक वजन | 527.52 ग्राम/मोल |
| पवित्रता | >90% (एचपीएलसी) |
| शक्ति | ≥1000 यू/एमजी |
| संरचना |
|
अवयव
| घटक सं. | नाम | 60224ES03 | 60224ईएस10 |
| 60224 | हाइग्रोमाइसिन बी (50 मिलीग्राम/एमएल) | 1 ग्राम (20 एमएल) | 10 x 1 ग्राम (20 एमएल) |
शिपिंग और भंडारण
हाइग्रोमाइसिन बी (50 मिलीग्राम/एमएल) उत्पादों को कहाँ संग्रहित किया जाना चाहिए 2℃ ~ 8℃ के लिए 2 साल।
निर्देश
1. आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली स्क्रीनिंग सांद्रता
स्थिर स्थानांतरण उपभेदों की जांच के लिए उपयोग किए जाने वाले हाइग्रोमाइसिन बी की कार्यशील सांद्रता को कोशिका के प्रकार, माध्यम, वृद्धि की स्थिति और कोशिका चयापचय दर के आधार पर भिन्न होना चाहिए, जिसकी अनुशंसित सांद्रता 50-1000 है μग्राम/एमएल। पहली प्रायोगिक प्रणाली के लिए, इष्टतम स्क्रीनिंग सांद्रता निर्धारित करने के लिए एक मारक वक्र (मारक वक्र), खुराक प्रतिक्रियाशीलता वक्र की सिफारिश की जाती है।
सामान्यतः स्तनधारी कोशिकाएँ: 50-500 μग्राम/एमएल; जीवाणु/पौधे कोशिकाएं: 20-200 μग्राम/एमएल; कवक: 300-1000 μग्राम/एमएल.
2. मारक वक्र की स्थापना
नोट:स्थिर कोशिका रेखाओं की स्क्रीनिंग के लिए, संक्रमित मेजबान कोशिकाओं को मारने में सक्षम एंटीबायोटिक दवाओं की न्यूनतम सांद्रता निर्धारित करना आवश्यक है। इसे मारने वाले वक्र (खुराक-प्रतिक्रिया वक्र) की स्थापना करके प्राप्त किया जा सकता है। कम से कम पाँच सांद्रता की व्यवस्था की जानी चाहिए।
1) दिन 1: अपरिवर्तित कोशिकाओं को 20-25% कोशिका घनत्व पर एक उपयुक्त संवर्धन प्लेट में रखा जाता है और रात भर संवर्धित किया जाता है।
नोट: जीवन शक्ति का पता लगाने के लिए उच्च घनत्व की आवश्यकता वाले कोशिकाओं के लिए टीकाकरण कोशिकाओं की मात्रा बढ़ाई जा सकती है।
2) कोशिका के प्रकार के अनुसार सांद्रता प्रवणता को उचित सीमा में सेट करें। स्तनधारी कोशिका 50, 100, 250, 500, 750, 1000 सेट कर सकती है μग्राम/एमएल। हाइग्रोमाइसिन बी घोल को 1:10 अनुपात में विआयनीकृत जल या पीबीएस बफर के साथ 5 मिलीग्राम/एमएल तक पतला करें। और फिर घोल को निम्न तालिका के अनुसार संबंधित कार्यशील सांद्रता तक पतला करें।
| अंतिम सांद्रता (μग्राम/एमएल) | मध्यम मात्रा (एमएल) | 5 मिलीग्राम/एमएल हाइग्रोमाइसिन बी की अतिरिक्त मात्रा (एमएल) |
| 50 | 9.9 | 0.1 |
| 100 | 9.8 | 0.2 |
| 250 | 9.5 | 0.5 |
| 500 | 9.0 | 1.0 |
| 750 | 8.5 | 1.5 |
| 1000 | 8.0 | 2.0 |
3) दिन 2: दवा की संगत सांद्रता वाले ताज़ा तैयार माध्यम से बदलें। प्रत्येक सांद्रता के लिए तीन समानांतर नमूने बनाएँ।
4) फिर हर 3-4 दिन में दवा युक्त ताजा माध्यम से प्रतिस्थापित करें।
5) निश्चित अंतराल पर (जैसे कि हर 2 दिन में) जीवित कोशिकाओं की गणना करें ताकि उचित सांद्रता निर्धारित की जा सके जो कि अप्रसारित कोशिकाओं की वृद्धि को रोकती है। स्थिर ट्रांसफ़ेक्टेंट चयन के लिए कार्यशील सांद्रता के रूप में सबसे कम सांद्रता का चयन करें जो आदर्श दिनों (आमतौर पर 7-10 दिन) के भीतर अधिकांश कोशिकाओं को मार सकती है।
3. स्तनधारी स्थिर रूप से संक्रमित कोशिका रेखाओं की जांच
1) अभिकर्मन के 48 घंटे बाद, कोशिकाओं को उचित सांद्रता (प्रत्यक्ष या पतला) में हाइग्रोमाइसिन बी युक्त स्क्रीनिंग माध्यम द्वारा उपसंस्कृत किया गया।
नोट: एंटीबायोटिक्स सक्रिय रूप से विभाजित होने वाली कोशिकाओं पर सबसे अच्छा काम करते हैं। यदि कोशिकाएँ बहुत घनी हैं, तो एंटीबायोटिक कोशिकाओं को नहीं मारेगा। कोशिकाओं को इस तरह विभाजित करें कि कोशिकाएँ 25% से ज़्यादा संलयित न हों।
2) स्क्रीनिंग माध्यम को हर 3-4 दिन में बदलें।
3) स्क्रीनिंग के 7 दिनों के बाद सेल कॉलोनी-गठन को मापें। होस्ट सेल के प्रकार, ट्रांसफ़ेक्शन और स्क्रीनिंग प्रभावशीलता के आधार पर कॉलोनी गठन में एक और सप्ताह या उससे अधिक समय लग सकता है।
4) 5-10 प्रतिरोधी क्लोन चुनें और उन्हें 35 मिमी सेल कल्चर प्लेट में स्थानांतरित करें, और 7 दिनों के लिए दवा युक्त स्क्रीनिंग माध्यम के साथ संवर्धित करें।
5) संवर्धन के लिए दवाओं के बिना ताजा माध्यम से प्रतिस्थापित करें।
दस्तावेज़:
सुरक्षा डेटा पत्रक
60224_एमएसडीएस_HB220420_EN.pdf
नियमावली
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