विवरण
ऑरियोबैसिडिन ए, जिसे एबीए, बेसिफुंगिन, ब्रियोमाइसिन ए के नाम से भी जाना जाता है, एक चक्रीय एस्टर पेप्टाइड एंटीबायोटिक है जिसे फिलामेंटस फंगस ऑरियोबैसिडियम पुल्लुलंस नंबर R106 से अलग किया गया है। इसमें मजबूत एंटी-फंगल क्षमता है और यह इनोसिटोल फॉस्फोराइलेटेड सेरामाइड सिंथेस AUR1 का अवरोधक है। यह कम सांद्रता (0.1-0.5 μg/mL) पर भी खमीर के लिए विषाक्त है। ऑरियोबैसिडिन ए के प्रति संवेदनशील फफूंद की प्रजातियों में सैकरोमाइसिस सेरेविसिया, स्किज़ोसैचरस पोम्बे, कैंडिडा ग्लाब्रेटा, एस्परगिलस निडुलन्स और ए. नाइजर शामिल हैं। इसके प्रति संवेदनशील फफूंद प्रजातियों में डेंटल यीस्ट (सैकरोमाइसिस सेरेविसिया), स्किज़ोसैचरमाइसिस बाजरा (स्किज़ोसैचरमाइसिस पोम्बे), कैंडिडा ग्लाब्रेटा (कैंडिडा ग्लाब्रेटा), एस्परगिलस नेस्ट (एस्परगिलस निडुलन्स) और एस्परगिलस नाइजर (ए. नाइजर) शामिल हैं। क्रियाविधि यह है कि ऑरियोबैसिडिन ए इनोसिटोल फॉस्फोरामिडाइट (इनोसिटोल फॉस्फोरिलसेरामाइड, आईपीसी) सिंथेस की गतिविधि को रोकता है, जिस पर फफूंद की वृद्धि निर्भर करती है, और स्फिंगोलिपिड संश्लेषण में हस्तक्षेप करता है, इस प्रकार स्ट्रेन को और अधिक नष्ट कर देता है। IPC सिंथेस को एनकोड करने वाले और भी जीन का अध्ययन किया गया है, जैसे कि सैकरोमाइसिस सेरेविसिया से AUR 1 जीन और A. साइनेंसिस से AURA जीन, जिसमें समरूपता है। इन कोडिंग जीन को म्यूट करने से स्ट्रेन ऑरियोबैसिडिन A के प्रति प्रतिरोधी हो जाते हैं, जैसे कि AUR 1-C जीन।
ऑरियोबैसिडिन ए सकारात्मक क्लोन की स्क्रीनिंग के लिए दवा चयन मार्कर के रूप में अत्यधिक उपयुक्त है। ऑरियोबैसिडिन ए प्रतिरोध यीस्ट सिंगल-हाइब्रिड और टू-हाइब्रिड अध्ययनों में भी एक आदर्श रिपोर्टर है। यह उत्पाद 1 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता के साथ मेथनॉल में घुले ऑरियोबैसिडिन ए का घोल है।
विशेषताएँ
पवित्रता≥97%
मानकीकृत उत्पादन, फैक्ट्री बड़े पैमाने पर उत्पादन मोड का उपयोग करना
अनुप्रयोग
यीस्ट दो-संकर अध्ययन
यीस्ट एक-संकर अध्ययन
कठोर यीस्ट दवा चयन मार्कर
ऑरियोबैसिडिन ए प्रतिरोध यीस्ट संकरण अध्ययन के लिए एक आदर्श रिपोर्टर है
विशेष विवरण
| CAS संख्या। | 127785-64-2 |
| आणविक सूत्र | सी60एच92एन8हे11 |
| आणविक वजन | 1101.42 ग्राम/मोल |
| उपस्थिति | तरल घोल |
| पवित्रता | ≥97% |
| घुलनशीलता | यह पाउडर डीएमएसओ और मेथनॉल (0.5-10 मिलीग्राम/एमएल); पानी में अघुलनशील |
| संरचना |
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अवयव
| घटक सं. | नाम | 60231ES03 | 60231ES08 | 60231ईएस10 |
| 60231 | ऑरियोबैसिडिन ए（आबा） | 1 मिलीग्राम(1 मिलीग्राम/एमएल) | 5×1 मिलीग्राम(1 मिलीग्राम/एमएल) | 10×1 मिलीग्राम(1 मिलीग्राम/एमएल) |
शिपिंग और भंडारण
ऑरियोबैसिडिन ए（आबा） उत्पादों को कहाँ संग्रहित किया जाना चाहिए -15℃ ~ -25℃ के लिए 2 साल।
निर्देश
1. कार्य एकाग्रता
कृपया विशिष्ट सांद्रता के लिए प्रासंगिक साहित्य देखें, तथा अपनी स्वयं की प्रयोगात्मक स्थितियों (जैसे प्रयोगात्मक उद्देश्य, कोशिका प्रकार, संवर्धन विशेषताएँ, आदि) के अनुसार अन्वेषण और अनुकूलन करें।
2. कोशिका प्रयोग (इन विट्रो प्रयोग)
ऑरियोबैसिडिन ए सेरामाइड नशा और आवश्यक इनोसिटोलफॉस्फोरिलसेरामाइड्स की कमी के माध्यम से खमीर कोशिकाओं की वृद्धि को रोकता है[1].
प्रत्येक CArG-बॉक्स मोटिफ के ट्रिपल टेंडेम रिपीट को संश्लेषित किया गया। सभी डीएनए टुकड़ों को उपयुक्त प्रतिबंध साइटों का उपयोग करके Y1H वेक्टर pAbAi (क्लोनटेक, माउंटेन व्यू, यूएसए) में क्लोन किया गया। फिर, प्रत्येक इकट्ठे pAbAi निर्माण को BstbI के साथ रैखिक किया गया और यीस्ट ट्रांसफॉर्मेशन सिस्टम 2 मैनुअल (क्लोनटेक, माउंटेन व्यू, यूएसए) के अनुसार सैकरोमाइस सेरेविसिया Y1HGold स्ट्रेन में बदल दिया गया। वांछित डीएनए टुकड़े वाले क्लोनों को 100 की सांद्रता में ऑरियोबैसिडिन ए के साथ पूरक सिंथेटिक यूरैसिल ड्रॉपआउट माध्यम पर ऑटो एक्टिवेशन के लिए जांचा गया।–900 एनजी/एमएल, जैसा कि संकेत दिया गया है (क्लोनटेक, माउंटेन व्यू, यूएसए)[2].
SlBES1 जीन के ओपन रीडिंग फ्रेम (ORF) को प्रवर्धित किया गया और pGBKT7-GAL4BD प्लास्मिड में लिगेट किया गया। फ्यूजन GAL4BD-SlBES1 निर्माणों को आगे Y2H गोल्ड यीस्ट कोशिकाओं में रूपांतरित किया गया। SD/−यीस्ट ट्रांसफॉर्मेंट्स की खेती के लिए ट्रिप मीडियम प्लेटों का उपयोग किया गया। αट्रांसफॉर्मेंट्स की -गैलेक्टोसिडेस गतिविधि की पहचान एक्स- द्वारा की गई थीα-gal और AUR1-C की अभिव्यक्ति ऑरियोबैसिडिन ए द्वारा जांची गई[3].
3. विभिन्न यीस्टों के लिए ऑरियोबैसिडिन की न्यूनतम अवरोधक सांद्रता
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| छानना | एमआईसी (µg/mL) |
| एस.सेरेविसी | ATCC9763 (द्विगुणित) | 0.2-0.4 |
| SH3328 (अगुणित) | 0.1 | |
| सेक खमीर (द्विगुणित) | 0.1-0.2 | |
| शोचू यीस्ट (द्विगुणित) | 0.1 | |
| बीयर यीस्ट (ट्रिप्लोइड या टेट्राप्लोइड) | 0.1 | |
| बेकर, नानबाई'एस खमीर (द्विगुणित) | 0.2-0.4 | |
| स्किज़ो.पोम्बे | जे.वाई.-745 (मोनोप्लोइड) | 0.1 |
| सी.एल्बिकेन्स | टीआईएमएम-0136（द्विगुणित） | 0.04 |
| C. उष्णकटिबंधीयहै | टीआईएमएम-0324（द्विगुणित） | 0.08 |
4. परिचालन प्रक्रियाएं (एबीए प्रतिरोधी यीस्ट परिवर्तन प्रणाली के लिए)
1) 50 मिली लीटर YPD माध्यम में 0.5 मिली लीटर ओवरनाइट यीस्ट कल्चर मिलाएं (संरचना: 1 लीटर तरल माध्यम में 10 ग्राम यीस्ट एक्सट्रैक्ट, 20 ग्राम पॉलीपेप्टोन, 20 ग्राम डी-ग्लूकोज होता है; ठोस माध्यम के लिए, अतिरिक्त 2% अगर मिलाएं)।
2) 30 पर इनक्यूबेट करें℃ लगभग 6 घंटे तक, जब तक OD660 1-2 न हो जाए। डिप्लोइड का उपयोग करते समय, OD660 को 2-4 मापें।
3) 1,000 पर अपकेंद्रित्र×5 मिनट के लिए जी.
4) 10 एमएल घोल ए (संरचना: 100 मिमी लिथियम एसीटेट, 10 मिमी ट्रिस-एचसीएल पीएच 7.5, 1 मिमी ईडीटीए) में गोली को फिर से डालें, फिर 1,000 पर सेंट्रीफ्यूज करें×5 मिनट के लिए जी.
5) इजब तक OD660 150 न हो जाए, तब तक गोली को विलयन A में निलंबित रखें।
6) एक ट्यूब में 100 µL सेल सस्पेंशन डालें और 30 °C पर इनक्यूबेट करें।℃ 1 घंटे के लिए.
7) 5 µg वेक्टर (वृत्ताकार या रैखिक डीएनए) और 150 µg वाहक डीएनए (जिसे 100 µg पर गर्म किया गया है) मिलाएं℃ 10 मिनट के लिए रखें और फिर तुरंत ठंडा कर लें)।
नोट: pAUR101 को रूपांतरण के लिए रैखिक डीएनए की आवश्यकता होती है। गोलाकार डीएनए का उपयोग करने से रूपांतरण दक्षता कम हो जाएगी या विफल भी हो सकती है। pAUR112 और pAUR123 को रूपांतरण के लिए पूर्ण प्लास्मिड डीएनए की आवश्यकता होती है।
8) 850 µL घोल B डालें (संरचना: 40 ग्राम पॉलीइथिलीन ग्लाइकॉल 4000 को 100 mL घोल A में घोलें और अच्छी तरह मिलाएँ, उपयोग से पहले ताजा तैयार करें) और धीरे से मिलाएँ।
9) 30 पर इनक्यूबेट करें℃ 30 मिनट के लिए, फिर 42 पर℃ 15 मिनट के लिए।
10) कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए रखें।
11) 1 मिनट के लिए 5,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, और गोली को 5 एमएल वाईपीडी माध्यम में पुनः निलंबित करें।
12) 30 पर इनक्यूबेट करें℃ 6 घंटे से लेकर पूरी रात तक।
13) 5,000-10,000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज करें, और गोली को 0.9% NaCl के 1-10 एमएल में पुनः निलंबित करें।
14) YPD चयनात्मक माध्यम प्लेटों (स्ट्रेन प्रकार के आधार पर AbA की एक निश्चित सांद्रता युक्त) पर सेल निलंबन के 100 µL को प्लेट करें।30 पर इनक्यूबेट करें℃ 3-4 दिनों तक जब तक परिवर्तन पूरा न हो जाए।
15) सकारात्मक रूपांतरणकर्ता चुनें, और/या रूपांतरण दक्षता निर्धारित करें (प्लास्मिड डीएनए के प्रति माइक्रोग्राम में रूपांतरित कॉलोनियों की संख्या के रूप में व्यक्त)।
दस्तावेज़:
सुरक्षा डेटा पत्रक
60231_एमएसडीएस_HB220420_EN.pdf
नियमावली
आंकड़ों
चित्र 1. यीस्ट प्लेट वृद्धि चार्ट
प्रायोगिक तनाव:जीएस115
उपयोग मात्रा: 0.05 माइक्रोग्राम/एमएल、0.1 माइक्रोग्राम/एमएल、0.5 माइक्रोग्राम/एमएल、1 μg/एमएल
इलाज: 3-5 दिन3 बजे0℃
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