Linear PEI 40000, reagen transfeksi yang lebih efisien
Secara umum, transfeksi adalah proses memasukkan asam nukleat (DNA atau RNA) secara artifisial ke dalam sel eukariotik. Reagen transfeksi, sesuai namanya, adalah serangkaian reagen yang terlibat dalam transfeksi. Selama proses transfeksi, kita sering kali direpotkan oleh rendahnya efisiensi transfeksi, rentang aplikasi yang sempit, toksisitas yang kuat, operasi yang rumit, dan harga reagen transfeksi yang mahal. Jadi, apakah ada reagen transfeksi yang dapat mengatasi masalah ini? Ya, PEI linier adalah pilihan terbaik untuk mengatasi masalah ini.
Catatan:
1. Apa saja jenis transfeksi sel?
2. Apa itu linear PEI MW 40000?
3. Bagaimana cara kerja linear PEI MW 40000?
4. Apa saja fitur PEI MW 40000?
5. Reagen transfeksi lainnya dari
6. Perhatikan Bacaan
1. Apa saja jenis transfeksi sel?
Sebelum memperkenalkan linear PEI MW 40000, mari kita pahami terlebih dahulu jenis-jenis transfeksi sel. Transfeksi sel sangat penting untuk penelitian genetik, penelitian protein, dan penelitian sitologi, yang mengacu pada proses memasukkan asam nukleat (DNA atau RNA) secara artifisial ke dalam sel dengan memanfaatkan cara infeksi non-virus. Tujuan utama transfeksi adalah untuk mempelajari fungsi gen atau produk gen, dengan meningkatkan atau menghambat ekspresi gen tertentu dalam sel, atau untuk menghasilkan protein rekombinan. Pengenalan asam nukleat eksogen akan mengubah karakteristik sel, sehingga mencapai tujuan transfeksi, yang berguna untuk mempelajari regulasi gen dan ekspresi protein, serta sintesis dan produksi protein.
Transfeksi sel dapat dibagi berdasarkan metode kimia, biologi, dan fisik, atau berdasarkan waktu tinggal gen asing di dalam sel. Dalam transfeksi sementara, asam nukleat yang dimasukkan dapat berada di dalam sel untuk waktu yang terbatas tanpa bereplikasi, sedangkan pada transfeksi stabil, asam nukleat yang dimasukkan terintegrasi ke dalam genom inang dan dapat diekspresikan dalam keturunan sel yang ditransfeksi.
Dengan begitu banyak metode transfeksi sel yang berbeda, bagaimana Anda memilih metode yang tepat?
Tidak ada satu pun metode transfeksi yang cocok untuk semua jenis sel dan memenuhi semua kebutuhan eksperimen. Metode transfeksi yang optimal harus dipilih sesuai dengan kebutuhan jenis sel dan kondisi eksperimen.
Saat ini, reagen transfeksi kimia masih menjadi metode transfeksi sel utama karena kemudahan pengoperasian dan kompatibilitasnya dengan berbagai lini sel.
2. Apa itu linear PEI MW 40000?
Polietilena Linier (PEI) MW40000 (lisis cepat) adalah reagen transfeksi sementara yang berbasis polietilenaimina dengan berat molekul 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 adalah polimer kationik bermuatan tinggi yang dapat dengan mudah mengikat molekul asam nukleat bermuatan negatif untuk membentuk kompleks, sehingga memasukkan kompleks ke dalam sel.
Dibandingkan dengan reagen transfeksi PEI 25000, PEI 40000 mudah larut dan dapat langsung dilarutkan dalam air. Selain itu, PEI 25000 mengandung 4-11% residu propionil, yang mencegah ikatan polimer dengan DNA.Tetapi PEI 40000 adalah konstruksi gudang yang lengkap, sehingga kinerjanya efisien secara konsisten.
3. Bagaimana cara kerja linear PEI MW 40000?
Polietilenaimina (PEI) merupakan vektor non-virus multifungsi yang sangat baik dengan adhesi sel yang baik dan dapat digunakan untuk mentransfeksi sel secara independen dari inhibitor lisosomal. PEI dan DNA terikat oleh gaya elektrostatik, yang menyebabkan DNA hancur dari struktur seperti gulungan longgar menjadi kompleks partikel bulat. Kompleks PEI-DNA biasanya bermuatan positif untuk berinteraksi secara elektrostatik dengan membran sel eksternal dan diserap oleh endositosis. Kompleks PEI-DNA yang diendositosis kemudian ditangkap oleh endosom untuk dipindahkan ke lisosom untuk didegradasi. Tekanan ion internal yang terus meningkat menyebabkan endosom membengkak dan pecah, melepaskan DNA asing ke dalam sitoplasma. Mekanisme transfeksi ini disebut efek "spons proton".
Penelitian telah menunjukkan bahwa molekul PEI dapat melapisi permukaan kompleks PEI-DNA untuk melindungi DNA dari degradasi nuklease di sitoplasma, sehingga memastikan pemindahan DNA asing dari sitoplasma ke nukleus. Selain itu, molekul PEI dapat masuk ke dalam membran fosfolipid dan menciptakan saluran yang stabil untuk mentransfer DNA ke dalam nukleus sel. Molekul PEI tidak memasuki nukleus sel dan memainkan peran penting sebagai vektor DNA.
Ekspresi gen dapat dideteksi 1-4 hari setelah gen eksogen dimasukkan ke dalam sel mamalia. Ekspresi ini terjadi karena sebagian DNA yang dimasukkan ditranskripsi menjadi mRNA setelah memasuki nukleus, kemudian ditranslasikan ke dalam sitoplasma. Karena metode ini relatif sederhana dan mudah diterapkan, dengan memilih vektor ekspresi dan metode transfeksi yang baik, jumlah ekspresi protein dapat mencapai tingkat yang lebih tinggi. Reagen transfeksi PEI telah banyak digunakan dalam penelitian ilmiah dan aplikasi industri sebagai metode transfeksi umum untuk mempelajari struktur dan fungsi protein.
4. Apa saja fitur PEI MW 40000?
Sebagai reagen transfeksi sementara dengan sitotoksisitas rendah, PEI 40000 memiliki efisiensi transfeksi tinggi dan efisiensi ekspresi gen tinggi pada sel-sel seperti HEK293 dan CHO. Reagen transfeksi PEI linier telah divalidasi untuk berbagai lini sel termasuk sel HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 dan Hela. Efisiensi transfeksi setinggi 80%~90%. Teruskan untuk melihat data kinerja:
- Efisiensi transfeksi tinggi, cocok untuk sel yang melekat dan tersuspensi
Cocok untuk berbagai lini sel termasuk HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2, dan sel Hela, dll., efisiensi transfeksinya mencapai 80%~90%.
Tabel 1.Daftar garis sel yang tervalidasi
| Sel yang melekat (1 μg DNA) | Efisiensi | Sel suspensi (2 μg DNA) | Efisiensi |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| SF9 adalah film horor yang disutradarai oleh John S. | 80%-90% | HEK-293T | 70% - 80% |
| HepG2 | 80%-90% | THP-1 | 70% - 80% |
| Hela | 80%-90% |
| |
Gambar 2. Plasmid GFP yang ditransfeksi PEI 40000 ke dalam sel HEK-293 yang melekat, efisiensi transfeksi mencapai 90% setelah 72 jam (kiri); PEI 40000 mentransfeksi plasmid GFP ke dalam sel suspensi CHO-K1, dan efisiensi transfeksi mencapai 80% setelah 72 jam (kanan)
- Toksisitas rendah
Ini memastikan kelangsungan hidup sel dan meningkatkan efisiensi transfeksi.
Gambar 3. PEI 40000 disediakan oleh
- Efisiensi transfeksi lebih tinggi dari PEI 25000, yang dapat sepenuhnya menggantikan PEI 25000
PEI 25000 mengandung 4-11% residu propionil, yang mencegah ikatan rangka polimer dengan DNA. Dibandingkan dengan PEI 25000, PEI 40000 merupakan konstruksi yang lengkap, sehingga kinerjanya selalu efisien.
Gambar 4. Sel HEK-293 ditransfeksi sementara dengan plasmid GFP menggunakan reagen transfeksi PEI 25000 dan PEI 40000, dan fluoresensi diamati setelah 72 jam. Hasil eksperimen: Efisiensi transfeksi PEI 40000 lebih baik daripada PEI25000.
- Konfigurasi sederhana dan waktu transfeksi singkat
Produk ini adalah jenis instan, yang dapat langsung dilarutkan dalam air tanpa pengaturan pH. Dan kompatibel dengan serum dan antibiotik, tidak perlu mengganti media.
- Hemat biaya, cocok untuk transfeksi sementara skala besar
Dibandingkan dengan produk impor,
5. Reagen Transfeksi Lainnya dari Yeasen
Tabel 2.Daftar
| Kucing# | Nama Produk | Jenis asam nukleat | Jenis sel |
| 40823ES | DNA | Penganut Dan Sel suspensi | |
| 40816ES | DNA | Penganut Dan Sel suspensi | |
| 40820ES | DNA | Penganut Dan Sel suspensi | |
| 40821ES | DNA | Penganut Dan Sel suspensi | |
| 40802ES | DNA (<10kb), shRNA | Asel yang melekat | |
| 40805ES | Suspensi Hieff Trans™ Bebas Sel Reagen Transfeksi Liposomal (Menanyakan) | DNA-nya (<10kb) | Sel suspensi (Untuk sel darah tersuspensi atau kekebalan sel, efisiensi transfeksi reagen kimia saat ini adalah tidak tinggi. Metode elektroporasi atau virus direkomendasikan.) |
| 40806ES | siRNA[Bahasa Indonesia]miRNA[Bahasa Indonesia]pra-miRNA, mimik miRNA, antimiRNA | Sel-sel yang melekat dan tersuspensi |
6. Perhatikan Bacaan
Reagen Transfeksi – Hieff Trans™ dan PEI
Panduan Pemilihan Produk Reagen Transfeksi Sel In Vitro
Referensi:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Perilaku Pembentukan dan Agregasi Kompleks Polietilenaimina-DNA. Departemen Farmasi, Nanjing 210009.
[2] Sabin, J., dkk. (2022). Wawasan baru tentang mekanisme transfeksi polietilenimina dan implikasinya terhadap terapi gen dan vaksin DNA. Koloid dan Permukaan B: Biointerfaces, 210, 112-219.
[3] Transfeksi sel mamalia sementara dengan polietilenimina (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ