Negli ultimi anni, con il rapido sviluppo delle tecniche di biologia molecolare, I metodi diagnostici basati sugli acidi nucleici sono stati ampiamente stabiliti e ampiamente applicati nei test di laboratorio sulle malattie umane. Rispetto ad altre tecniche di amplificazione degli acidi nucleici, l'amplificazione isotermica offre i vantaggi di essere veloce, efficiente e specifica e non richiede attrezzature specializzate. Pertanto, sin dalla sua comparsa, è stata considerata da molti studiosi come un metodo di rilevamento che potrebbe potenzialmente rivaleggiare con la PCR.

Di conseguenza, si ritiene che lo sviluppo e l'applicazione di strumenti e kit diagnostici basati sulla tecnologia di amplificazione isotermica rappresenteranno una nuova direzione per i test Point-of-Care (POCT) nella diagnostica molecolare.

Introduzione ai principi delle principali tecnologie di amplificazione isotermica

1、Amplificazione isotermica mediata da loop

(LAMP) Tecnologia

Principio:L'amplificazione isotermica mediata da loop (LAMP) utilizza la DNA polimerasi Bst, che ha attività di spostamento del filamento. Progetta quattro tipi di primer specifici che hanno come target sei regioni del gene target, consentendo un'amplificazione efficiente, rapida e specifica della sequenza target in condizioni isotermiche. L'amplificazione può essere condotta a una temperatura costante di 60-65 °C e, entro 15-60 minuti, un'amplificazione dell'acido nucleico di 10⁹ a 10¹⁰ i tempi possono essere raggiunti.

Vantaggi e applicazioni:A causa di la sua rapida reazione, l'elevata specificità, l'attrezzatura semplice e facile da usare e i risultati facili da interpretare, l'amplificazione isotermica è stata applicata nella rilevazione di batteri patogeni, parassiti, virus, malattie e prodotti geneticamente modificati. Si prevede inoltre che sarà ampiamente utilizzato nella diagnosi clinica delle malattie infettive, nel monitoraggio ambientale, nella sicurezza alimentare e in altri campi. È diventato un metodo ideale adatto per i test molecolari Point-of-Care (POCT) piattaforme.

Classificazione:I metodi di rilevamento LAMP sono classificati in diversi tipi, tra cui la turbidimetria, i metodi indicatori di pH, i metodi con coloranti fluorescenti (come NHB, calceina, SYBR Green, Syto, ecc.) e i metodi con sonda fluorescente.

2. Tecnologia di amplificazione della polimerasi ricombinante (RPA)

Principio:L'enzima ricombinasi, quando legato ai primer, forma un complesso proteina-DNA che può ricercare sequenze omologhe all'interno del DNA a doppio filamento. Una volta che i primer hanno localizzato le sequenze omologhe, si verifica una reazione di scambio di filamento, che porta alla formazione e all'inizio della sintesi del DNA, che amplifica esponenzialmente la regione bersaglio sul modello. Il filamento di DNA spostato si lega alla proteina di legame a singolo filamento (SSB) per impedire un ulteriore spostamento. In questo sistema, un evento di sintesi è avviato da due primer opposti, basandosi principalmente sulle attività della ricombinasi, dell'enzima Bsu e della proteina SSB. La tecnologia può raggiungere un rapido rilevamento del bersaglio di interesse entro 10-30 minuti a temperature comprese tra 37 e 42 °C.

Vantaggi e applicazioni:RPA vanta elevata sensibilità, forte specificità, bassa dipendenza da apparecchiature specializzate, e la capacità di integrare vari formati di rilevamento. È particolarmente adatto per test point-of-care a livello di base e in contesti di campo. L'RPA può essere ampiamente applicato nella diagnostica in vitro, nelle malattie animali, nella sicurezza alimentare, nella biosicurezza, nell'agricoltura e in altri campi.

Classificazione:I metodi di rilevamento dell'RPA sono suddivisi in diverse tipologie, tra cui l'elettroforesi su gel, il metodo della sonda EXO, il metodo della sonda Fpg, il dipstick a flusso laterale (LF-RPA) e l'analisi di flocculazione, tra gli altri.

Vetrina delle prestazioni del prodotto

01 reagenti RT-LAMP coloranti sensibili al pH

pH Sensitive Dye RT-LAMP utilizza un colorante visivo come indicatore sensibile, in condizioni isotermiche di 60-65℃, per completare l'amplificazione dell'acido nucleico dell'RNA in un unico passaggio utilizzando un bagno d'acqua a temperatura costante o una macchina PCR standard. In soli 30 minuti, il cambiamento di colore dopo la reazione può essere utilizzato per determinare se è presente un'infezione da patogeno, con risultati più intuitivi (positivo è giallo-arancio, negativo è magenta). Questo metodo è adatto per test rapidi su grandi popolazioni.

Prodotti consigliati:

Kit colorante sensibile al pH RT-LAMP (13906ES)
Kit liofilizzato RT-LAMP pH Sensitive Dye versione cromogenica (13920ES)

Vetrina delle prestazioni:

1.Guida alla selezione della miscela RT-LAMP/RPA

Classificazione del prodotto	Miscela RT-LAMP			Miscela RPA
Nome del prodotto	Kit di analisi del colorante RT-LAMP (UDG plus)	Kit colorante sensibile al pH RT-LAMP	Kit liofilizzato RT-LAMP pH Sensitive Dye versione cromogenica	Amplificatore a fusibile rapido
Numero articolo prodotto	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Categoria di prodotto	Colorante fluorescente	Tintura sensibile al pH	Tintura sensibile al pH	Sonda
Componenti del prodotto	2 componenti Tampone, miscela enzimatica	3 componenti Tampone, enzima RT, enzima Bst	4 componenti Tampone, enzima RT, enzima Bst, lioprotettore	4 componenti Tampone, miscela enzimatica, acetato di magnesio
Liofilizzazione supportata	NO	Sì, senza lioprotettore	Sì, contenente lioprotettore	NO

2.Guida alla selezione degli enzimi LAMP/RT-LAMP

Classificazione del prodotto	Enzima Bst		Trascrittasi inversa		Enzima UDG
Nome del prodotto	Bst Più	Bst Plus liofilizzato	Ⅲ Trascrittasi inversa	III Trascrittasi inversa, Senza glicerolo	UDG	UDG, senza glicerolo
Numero articolo prodotto	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Attività enzimatica	40 unità/μl	60 unità/μl	200 unità/μl	600 unità/μl	1 unità/μl	1 unità/μl
Componenti del prodotto	3 componenti	2 componenti	2 componenti	monocomponente	separare- componente	monocomponente
Liofilizzazione supportata	NO	SÌ	NO	SÌ	NO	SÌ

3. Guida alla selezione degli enzimi RPA

Classificazione del prodotto	Bsu	T4X.	T4 E	SSB	CK	ESODO
Nome del prodotto	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	32 giri	Creatina chinasi	Esonucleasi III
Numero articolo prodotto	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Attività enzimatica	5 unità/μl	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 unità/μl
Componenti del prodotto	monocomponente	monocomponente	monocomponente	monocomponente	monocomponente	2 componenti
Liofilizzazione supportata	NO	NO	NO	NO	NO	NO