La purificazione delle proteine è una tecnica fondamentale in biochimica e biologia molecolare, ampiamente utilizzata nella ricerca, nella diagnostica e nelle applicazioni terapeutiche. Per studiare una proteina specifica, il primo passo è isolarla e purificarla da campioni biologici. Tuttavia, ottenere proteine ad alta purezza può essere una sfida, data la diversità delle proteine e la complessità dei sistemi biologici. Comprendere i principi fondamentali della purificazione delle proteine e selezionare le tecniche giuste per la tua ricerca può migliorare notevolmente l'efficienza e la resa del tuo flusso di lavoro.
Le basi della purificazione delle proteine
La purificazione delle proteine si basa sulle differenze nelle proprietà fisiche e chimiche delle proteine, come dimensioni, carica, idrofobicità e affinità per specifici ligandi. Sfruttando queste differenze, i ricercatori possono separare efficacemente le proteine target da altri componenti biologici, riducendo al minimo la contaminazione.
Ecco le principali tecniche di purificazione delle proteine basate su distinti meccanismi di separazione:
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| Filtrazione a gel | Scambio ionico | Interazione idrofobica | Affinità |
| Meccanismo di separazione | Misurare | Carica superficiale delle proteine | Idrofobicità | Affinità specifica |
| Selettività | Medio | Alto | Alto-Medio | Molto alto |
| Capacità di carico | Basso | Alto | Alto | Alto |
| Velocità di purificazione | Medio-Basso | Alto | Alto | Alto |
| Biocompatibilità | Molto bene | Bene | Medio-buono | Bene |
| Resa proteica target | Alto | Alto | Medio-Alto | Alto |
Ognuna di queste tecniche può essere ottimizzata selezionando i materiali e le colonne appropriati. Il metodo ideale dipende dalle caratteristiche della proteina e dal livello di purezza richiesto per le applicazioni downstream.
Ottimizzazione del flusso di lavoro di purificazione delle proteine con Yfacilitare Prodotti biologici
A Sììì Biologia, forniamo un'ampia gamma di reagenti e materiali di alta qualità progettati per semplificare la purificazione delle proteine. Sia che tu stia gestendo campioni biologici complessi o richieda proteine ad alta resa e purezza, offriamo strumenti per migliorare il tuo processo di purificazione. Ecco una panoramica di alcuni dei nostri prodotti chiave per aiutarti a ottimizzare i tuoi flussi di lavoro di purificazione:
La sua proteina di purificazione del tag (Cat#20502ES):
Nell'espressione proteica ricombinante, La sua etichetta (tipicamente 6×His) è ampiamente utilizzato per le sue piccole dimensioni, la bassa immunogenicità e l'impatto minimo sulla funzione proteica. Le sue proteine tag possono essere purificate in modo efficiente mediante resine di affinità chelate con ioni nichel, come le resine Ni-NTA. Resina di agarosio Ni-NTA HisSep (Cat#20502ES) fornito da Yfacilitare Biologia utilizza gel di agarosio altamente reticolato come matrice, combinato con il ligando azoto-acido triacetico (NTA) quad-coordinato per formare chelati di ioni nichel stabili. La struttura combinata assicura un legame proteico efficiente e prestazioni di eluizione.
Purificazione dell'affinità dell'anticorpo tag
La purificazione di affinità degli anticorpi tag utilizza un legame altamente specifico tra l'anticorpo e il suo tag specifico per ottenere la purificazione della proteina di fusione. I tag comuni includono Bandiera, HA, Myc, ecc. Utilizzando il corrispondente terreno di coltura con affinità anticorpale, la proteina di interesse può essere isolata in modo efficiente da campioni complessi.
Biologia Yeasen fornisce una varietà di prodotti per la purificazione dell'affinità degli anticorpi etichettati:
- Affinità anti-bandiera Gel (Cat#20584ES):
Preparato da anticorpo monoclonale murino IgG2b di alta qualità con gel di agarosio altamente reticolato al 4% tramiteugh accoppiamento di fornitura, ha un'elevata capacità di caricamento della proteina di fusione Flag-tag, suutilizzabile per l'immunoprecipitazione e la purificazione delle proteine Flag-tag. yeasen.com
- Gel di affinità anti-HA(Gatto#20586È):
Preparato da anticorpo monoclonale IgG1 murino di alta qualità e gel Sepharose 4B tramite accoppiamento di fornitura, ha un'elevata capacità di caricamento delle proteine di fusione HA-tag, adatto per l'immunoprecipitazione e la purificazione delle proteine HA-tag. yeasen.con
- Gel di affinità anti-Myc(Gatto#20587È）:
L'anticorpo monoclonale murino IgG1 di alta qualità è accoppiato al gel Sepharose 4B, progettato per la purificazione delle proteine marcate con Myc, con elevata specificità ed elevata capacità di legame.
- Perle immunomagnetiche anti-bandiera(Cat#20565ES）:
Questa perla immunomagnetica è accoppiata a microsfere di agarosio magnetiche utilizzando un anticorpo monoclonale IgG2b di alta qualità derivato dal topo, in grado di purificare rapidamente le proteine contrassegnate con Flag sotto l'azione di campi magnetici ed è adatto per la purificazione di campioni di piccole dimensioni.
Purificazione dell'affinità dell'anticorpo (Cat#36401ES):
Purificazione dell'affinità degli anticorpi è un metodo di utilizzo del legame specifico di un anticorpo al suo antigene per la purificazione delle proteine. La resina di purificazione dell'agarosio della proteina A ricombinante resistente agli alcali (Cat#36401ES) è comunemente utilizzata come mezzo di purificazione dell'affinità degli anticorpi ed è ampiamente utilizzata per la purificazione e l'arricchimento degli anticorpi.
Proteinasi
Negli studi sulle proteine, le proteasi vengono impiegate per scindere i tag di fusione, ripristinando lo stato naturale della proteina target. L'incorporazione di queste proteasi nel flusso di lavoro di purificazione delle proteine può migliorare la qualità e la funzionalità delle proteine target, facilitando progetti di ricerca e sviluppo avanzati.
- Enterochinasi ricombinante (Cat#20401ES):
L'enterochinasi, nota anche come enteropeptidasi, è una serina proteasi che scinde specificamente la sequenza amminoacidica DDDDK. L'enterochinasi ricombinante di Yeasen è espressa in Escherichia coli ed è privo di tag, assicurando che non interferisca con le applicazioni downstream. Questo enzima è ideale per rimuovere i tag di fusione dalle proteine ricombinanti, facilitando la produzione di proteine native per studi strutturali e funzionali.
- lPNGase F (Cat#20407ES):
PNGase F è un'amidasi che scinde specificamente tra i residui più interni di GlcNAc e Asn delle glicoproteine N-linked. La PNGase F di Yeasen è fornita a una concentrazione di 100.000 U/mL, offrendo un'elevata attività per le reazioni di deglicosilazione. Questo enzima è fondamentale per studiare le strutture e le funzioni delle glicoproteine, poiché rimuove i glicani N-linked senza influenzare lo scheletro del peptide.
- Tripsina ricombinante (MS-SAFE) (Cat#20416ES):
La tripsina è una serina proteasi che scinde i legami peptidici sul lato carbossilico dei residui di lisina e arginina. La tripsina ricombinante di Yeasen è MS-SAFE, il che significa che è adatta per applicazioni di spettrometria di massa grazie alla sua elevata purezza e alla minima attività autolitica. Questo enzima è ideale per studi proteomici, inclusa la digestione proteica per analisi di spettrometria di massa.
| Purificazione Metodo | Tipo di reagente | Tipo di prodotto | Prodotti consigliati |
| Filtrazione a gel | Destrano Gel Cromatografia | Riempitivi per dissalazione Colonne preconfezionate di desalinizzazione Colonne di gravità per la desalinizzazione Colonne di spin
| Colonna di desalinizzazione G25 M(Cat#20590ES） Colonna di desalinizzazione centrifuga, 0,5 mL (Cat#20599ES） Colonna di desalinizzazione per gravità, 8.3 ml (Cat#20741ES） |
| Agarosio Gel Cromatografia | Riempitivo Colonne preconfezionate | Imballaggio per cromatografia su gel di agarosio ad alta risoluzione Geldex 200 PG (10-600 kDa) (Cat#20598ES) Colonna cromatografica Geldex 200 PG (Cat#20593ES） | |
| Scambio ionico | Scambio anionico Cromatografia | Riempitivo Colonne preconfezionate | Q Agarose HP (Q Strong Anion Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20460ES) Colonna preconfezionata Q HP Strong Anion Exchange, 5 mL (Cat#20462ES) |
| Cromatografia a scambio cationico | SP Agarosio HP (SP Strong Cation Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20463ES) Colonna preconfezionata SP HP Strong Cation Exchange, 5 mL (Cat#20465ES) | ||
| Cromatografia di interazione idrofobica | Debole idrofobico Cromatografia | Riempitivo Colonne preconfezionate | Mezzo cromatografico idrofobico debole butilico ad alta risoluzione (Cat#20484ES) Colonna precaricata per cromatografia butilica HP debolmente idrofobica, 5 mL (Cat#20485ES) |
| Forte idrofobico Cromatografia | Mezzo cromatografico fortemente idrofobico al fenile ad alta risoluzione (Cat#20486ES) Colonna precaricata per cromatografia fortemente idrofobica Phenyl HP, 5 mL (Cat#20487ES) | ||
| Purificazione per affinità | Il suo tag Purificazione delle proteine | Resina Colonne preconfezionate Perle magnetiche di purificazione
| Resina di purificazione dell'agarosio proteico His-tag (Cat#20502ES) Colonna precaricata per la purificazione delle proteine His-tag, 5 mL (Cat#20504ES) Perle magnetiche per la purificazione delle proteine His-tag (Cat#20561ES) |
| IVA-etichetta Purificazione delle proteine | Resina Colonne preconfezionate Perle magnetiche di purificazione
| Resina di agarosio di glutatione (per la purificazione delle proteine marcate con GST) (Cat#20507ES) Colonna precaricata per la purificazione delle proteine con tag GST, 5 mL (Cat#20510ES) Perle magnetiche per la purificazione delle proteine con etichetta GST (Cat#20562ES) | |
| MBP-etichetta Purificazione delle proteine | Resina Colonne preconfezionate
| Resina di purificazione altamente reticolata di proteine marcate MBP (Cat#20515ES) Colonna precaricata per la purificazione di proteine marcate MBP, 5 ml (Cat. n. 20517ES) | |
| Streptococco(Ⅱ) Etichetta Purificazione delle proteine | Resina Colonne preconfezionate
| Resina di purificazione dell'agarosio proteico marcato con Strep(II) (Cat#20495ES) | |
| Bioti-etichetta Purificazione delle proteine | Resina Colonne preconfezionate Perle immunomagnetiche | Resina di purificazione dell'agarosio streptavidina (Cat#20512ES) Colonna precaricata per purificazione molecolare della biotina, 5 mL (Cat#20514ES) Perle immunomagnetiche di streptavidina (SAV) (Cat#47503ES) | |
| Purificazione dell'affinità degli anticorpi tag | Gel Perle immunomagnetiche | Gel purificante Anti-Flag Affinity (Cat#20584ES) Gel di purificazione per affinità anti-HA (Cat#20586ES) Gel purificante per affinità anti-Myc (Cat#20587ES) Perle immunomagnetiche anti-bandiera (Cat#20565ES) | |
| Purificazione dell'affinità degli anticorpi | Resina Colonne preconfezionate Perle immunomagnetiche | Resina di purificazione dell'agarosio della proteina A ricombinante (Cat#36401ES) Resina di purificazione dell'agarosio proteico G (Cat#36405ES) Resina di purificazione dell'agarosio proteico A/G (Cat#36403ES) Perle immunomagnetiche di proteine A/G (Cat#36417ES) | |
| Altra purificazione dell'affinità degli anticorpi | Resina Colonne preconfezionate
| Resina di purificazione per la rimozione ad alta efficienza delle endotossine (Cat#20518ES) Terreno di purificazione per affinità con eparina (Cat#20493ES) | |
| Altro prodotto | Proteasi | Enzimi di scissione dei tag Glicosidasi Enzimi di grado spettrometrico di massa | E.coli Enterochinasi ricombinante espressa (senza etichetta) (Cat#20401ES) Trombina bovina (alta vitalità, >2000 UI/mg) (Cat#20402ES) rTEV Proteasi Virus dell'incisione del tabacco ricombinante Proteasi (Cat#20403ES) PNGasi F, N-glicosidasi F (100000 U/mL) (Cat#20407ES) Tripsina ricombinante (MS-SAFE) Tripsina ricombinante (grado spettrometria di massa) (Cat#20416ES) |
| Materiali di consumo per cromatografia | Colonne vuote a flusso gravitazionale tipo Colonne vuote Colonne YXK Sacche per dialisi | Colonna vuota per cromatografia gravitazionale da 12 mL (Cat#20523ES) Colonna vuota tipo C da 5 mL (collegata ad Akata, siringa o pompa peristaltica) (Cat#20526ES) Colonna vuota per cromatografia YXK16/70 (Cat#20443ES) Sacca per dialisi da 27 mm (MWCO 50 kDa) (Cat#20534ES) |
Conclusione: adatta il flusso di lavoro alle tue esigenze
Ottimizzare il flusso di lavoro di purificazione delle proteine è fondamentale per ottenere proteine ad alta purezza e ad alta resa per la tua ricerca o applicazione. Comprendendo i principi di purificazione e selezionando gli strumenti giusti, puoi semplificare il tuo processo ed evitare le insidie più comuni. Sììì Biology fornisce reagenti e materiali di consumo della massima qualità per tutte le fasi di purificazione delle proteine, garantendo che le vostre proteine siano pure, funzionali e pronte per l'analisi.
Per saperne di più su come i nostri prodotti possono migliorare il processo di purificazione delle proteine, visita le nostre pagine dedicate ai prodotti o contatta il nostro team per consigli personalizzati.
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