Nel campo della ricerca biomedica, la purificazione delle proteine è una tecnologia chiave per esplorare i misteri della vita. Tuttavia, i metodi di purificazione tradizionali lottano con l'inefficienza e i costi elevati, soprattutto per le proteine di membrana, che sono al centro della ricerca di biologia strutturale. Queste proteine sono strutturalmente complesse, hanno bassi livelli di espressione nelle membrane cellulari e sono sensibili alle condizioni ambientali, rendendo la loro purificazione particolarmente difficile. Ora, Yeasen Biotech, con le sue eccezionali capacità di R&S, ha lanciato l'aggiornamento Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES), un potente strumento per la purificazione efficiente e conveniente delle proteine, anche per le proteine di membrana più complesse.
Prestazioni del prodotto
1. Elevata specificità e elevata capacità di legame: vantaggi chiave per la cattura delle proteine target
Sììì Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) viene preparato accoppiando covalentemente anticorpi monoclonali IgG2b di topo di alta qualità con gel di agarosio altamente reticolato al 4%. Questo esclusivo processo di produzione conferisce al prodotto una specificità estremamente elevata, consentendogli di riconoscere e legare con precisione le proteine di fusione con il tag Flag. Che si tratti della proteina di fusione Flag N-terminale modificata da Met (Met-Flag-Proteina), la proteina di fusione N-terminale Flag (Proteina-bandiera), o la proteina di fusione Flag C-terminale (Bandiera proteica), il gel può gestirli facilmente.
Nella purificazione delle proteine di membrana, questa specificità è particolarmente importante perché queste proteine sono strutturalmente complesse e inclini a legami non specifici con altre proteine. L'elevata specificità del gel Flag riduce efficacemente l'interferenza da proteine non specifiche, garantendo un'elevata purezza delle proteine di membrana purificate. Inoltre, il gel ha un'elevata capacità di legame per le proteine di fusione contrassegnate con Flag (almeno 1,1 mg di proteine/mL gel). Ciò significa che anche se la proteina target è espressa a bassi livelli, può comunque essere catturata e purificata in modo efficiente utilizzando il gel Flag.
2. Elevata purezza e alta resa: abilitazione delle applicazioni downstream
Sììì Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) ha un legame non specifico minimo di impurità, con conseguenti campioni proteici altamente puri dopo la purificazione. Ciò è fondamentale per applicazioni downstream come saggi di bioattività e analisi strutturali. I campioni proteici ad alta purezza forniscono dati sperimentali più accurati, gettando solide basi per gli studi dei ricercatori.
3. Flusso di lavoro sperimentale ottimizzato: semplificazione delle sfide della purificazione delle proteine
La purificazione delle proteine deve essere condotta in condizioni miti per evitare danni strutturali alle proteine, specialmente per le proteine di membrana complesse. Yeasen Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) è progettato con questo in mente. Il suo buffer di archiviazione è TBS contenente il 50% di glicerolo a pH 7.4, che non solo protegge l'attività del gel, ma fornisce anche un ambiente delicato per la purificazione delle proteine.
Il processo di purificazione con il gel Flag è semplice ed efficiente. Per facilitare l'uso dell'eluizione del peptide 1×Flag, la confezione del prodotto include un peptide 1×Flag omaggio (Cat#20572ES). Ciò rende il processo di eluizione delicato (senza quasi alcun danno alle proteine) e molto comodo (migliorando ulteriormente la facilità di sperimentazione).
4. Diverse dimensioni e opzioni di spedizione flessibili: soddisfare diverse esigenze sperimentali
Considerando le diverse scale e le esigenze dei diversi laboratori, Yeasen offre il gel Flag in più dimensioni, tra cui 1 ml, 5 ml, 25 ml e 100 ml. Che si tratti di esplorazione preliminare su piccola scala o di produzione di proteine su larga scala, c'è un'opzione adatta disponibile. Per acquisti annuali di grandi volumi, i clienti possono scegliere di ricevere spedizioni in lotti, il che consente loro di usufruire di sconti sui prezzi evitando la pressione di un inventario eccessivo.
Dati di prova
 | M: Marcatore proteico 1: Campione grezzo pre-colonna di proteine Flag-N/Flag-M/Flag-C 2: Flusso post-colonna della proteina Flag-N/Flag-M/Flag-C 3: Eluizione (eluizione a pH 2,7) 4: Eluizione (eluizione a pH 12) 5: Eluizione (1×Eluizione del peptide Flag) 6: Gel purificato (eluizione a pH 2,7) 7: Gel purificato (eluizione a pH 12) 8: Gel purificato (1×Eluizione del peptide Flag) UN：Bandiera-N B：Bandiera-M C：Bandiera-C |
Figura 1. Sììì Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) risultati della purificazione per proteine a bassa espressione (Flag-N (a), Flag-M (b), Flag-C (c)) mostrati in SDS-PAGE.
 | M: Marcatore proteico 1: Campione grezzo pre-colonna della proteina Flag-C 2: Flusso post-colonna della proteina Flag-C 3: Eluizione (eluizione a pH 2,7) 4: Eluizione (eluizione a pH 12) 5: Eluizione (1×Eluizione del peptide Flag) 6: Gel purificato (pH 2.7 eluizione) 7: Gel purificato (eluizione a pH 12) 8: Gel purificato (1×Eluizione del peptide Flag) UN：Sììì B：Marca S* C：Marchio G* |
Figura 2. Confronto di Yeasen (a) conBrand S* (b) e Brand G* (c) Gel anti-Flag nella purificazione di proteine a bassa espressione (ad esempio proteine di membrana) mostrate in SDS-PAGE.
Conclusioni:
1. Sììì Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) ha un'elevata specificità e può legarsi ai tag Flag in varie posizioni (proteine di fusione Flag N-terminali, proteine di fusione Flag N-terminali modificate da Met, proteine di fusione Flag C-terminali).
2. In condizioni di espressione proteica bersaglio estremamente bassa (ad esempio, proteine di membrana), Yeasen Gel di affinità anti-DYKDDDDK(Flag) (Cat#20584ES) raggiunge rese e purezze significativamente più elevate rispetto ai concorrenti. L'uso di Yeasen il peptide 1×Flag complementare (Cat#20572ES) per l'eluizione fornisce risultati ancora migliori.
Soluzioni complete per proteine di fusione contrassegnate con flag:
Enterochinasi ricombinante (Cat#20395ES): Una proteasi specifica che scinde l'estremità carbossilica della lisina preceduta da quattro acidi aspartici: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys. Questa sequenza fa parte del tag Flag dell'octapeptide (DYKDDDDK). L'enterochinasi ricombinante (rEK) può facilmente rimuovere il tag Flag dalle proteine di fusione, rendendolo uno strumento ideale per studiare la struttura e la funzione delle proteine native.
Anti-DYKDDDDK(Flag) MagBeads (Cat#20565ES): Microsfere magnetiche polimeriche preparate mediante accoppiamento covalente di anticorpi monoclonali anti-DYKDDDDK (Flag) di topo di alta qualità con sfere magnetiche a base di silice (diametro Di 200 nm). Queste perle sono adatte per l'immunoprecipitazione (IP) o la co-immunoprecipitazione (Co-IP) di proteine con tag Flag.
Informazioni sul prodotto
| Nome del prodotto | Numero di prodotto | Specificazione |
| 1 ml./5 ml/25 ml | ||
| Enterochinasi bovina ricombinante, His, espressa nel lievito | 100 Io/500 U/5000 U | |
| Anti-DYKDDDDK(Flag) MagBeads | 1 ml./5 ml. |