Con il rapido sviluppo della glicoproteomica e della ricerca sui farmaci anticorpali, anche la modifica della glicosilazione ha attirato molta attenzione. Il contatto tra cellule e cellule, e tra cellule e patogeni, è completato principalmente attraverso l'interazione di zuccheri e proteine, e la glicosilazione determina le proprietà di adesione dei glicoconiugati. Nelle IgG, la glicosilazione N-linked conservata in Asn297 nella regione Fc è anch'essa cruciale per la sua attività. Inoltre, alcuni anticorpi hanno anche N-glicani aggiuntivi, che, insieme al sito conservato in Asn297 nella regione Fc, influenzano il riconoscimento, l'emivita e la risposta immunitaria dell'anticorpo.
La glicosilazione proteica è una complessa modifica post-traduzionale che coinvolge la connessione delle catene glicaniche in siti specifici sulle proteine. A seconda del tipo di catena glicanica, le glicoproteine sono divise in glicoproteine N-linked, glicoproteine O-linked, ecc.; inoltre, la glicosilazione proteica è anche influenzata dal tipo di cellula ospite e dalle condizioni di fermentazione (come terreno di coltura, valore del pH, temperatura, ecc.). Pertanto, le glicoproteine solitamente hanno eterogeneità nei modelli di glicosilazione, inclusi siti di glicosilazione, livelli di glicosilazione e la struttura specifica delle catene glicaniche, rendendo l'analisi della catena glicanica e il lavoro di caratterizzazione strutturale estremamente impegnativo. Per ottenere la massima quantità di informazioni strutturali sulla catena glicanica, la strategia principale dell'analisi della catena glicanica è quella di rilasciare prima le catene glicaniche dalle proteine e quindi eseguire un'analisi e una caratterizzazione dettagliate. In questa strategia, un metodo di deglicosilazione efficiente, accurato e stabile è fondamentale.
Attualmente per la deglicosilazione sono ampiamente utilizzati metodi enzimatici. Per i glicani N-legati, gli enzimi comunemente utilizzati includono PNGase F, Endo H ed Endo S.
Introduzione al prodotto
PNGasi F è il metodo enzimatico più efficace per rimuovere quasi tutti i composti N-legati oligosaccaridi in glicoproteine, che possono scindere glicoproteine oligosaccaridiche ad alto contenuto di mannosio, ibride e complesse collegate da asparagina, rimuovendo specificamente i glicani N-linked. Il sito di scissione è: il legame ammidico tra la N-acetilglucosamina (GlcNAc) più interna e il residuo di asparagina, convertendo al contempo l'asparagina sulla proteina dopo idrolisi enzimatica in acido aspartico.
Quando il fucosio α1-6 si trova nel nucleo del GlcNAc, anche la PNGasi F può tagliare; solo quando il fucosio α1-3 si trova nel nucleo del GlcNAc (comune nelle glicoproteine di piante e insetti), la PNGasi F non può tagliare.
La nostra azienda offre convenzionale PNGase F (Cat#20407ES)，Tuttavia, la reazione enzimatica convenzionale PNGase F richiede diverse ore per rilasciare gli N-glicani degli anticorpi e, a causa della preferenza per il rilascio di glicani, una deglicosilazione incompleta può portare a risultati distorti e la distribuzione dei glicani ottenuta potrebbe non rappresentare la corretta composizione degli anticorpi terapeutici. Pertanto, ottenere un profilo N-glicano accurato il più rapidamente possibile è fondamentale per il monitoraggio della glicosilazione durante il processo di produzione di anticorpi e proteine di fusione di anticorpi e altri agenti bioterapeutici.
PNGase veloce F (Cat#20406ES) è un reagente ricombinante ottimizzato che può rapidamente e completamente deglicosilare anticorpi, immunoglobuline, proteine di fusione e altre glicoproteine in pochi minuti. Questo enzima può rimuovere rapidamente e senza preferenze tutti gli N-glicani e può essere utilizzato direttamente per analisi cromatografiche o di spettrometria di massa a valle.
Caratteristiche del prodotto:
Veloce: Deglicosilazione completa e rapida in pochi minuti.
Elevata purezza: Nessuna contaminazione da proteasi e glicosidasi, purezza ≥95%.
Non selettivo: Rimuovere rapidamente e senza preferenze tutti gli N-glicani.
Buona compatibilità: Utilizzato direttamente per analisi cromatografiche o spettrometriche di massa a valle.
Endo H è una glicosidasi ricombinante in grado di scindere la struttura centrale del chitobiosio degli oligosaccaridi ad alto contenuto di mannosio e di alcuni oligosaccaridi di tipo ibrido nelle N-glicoproteine, rimuovendo l'alto contenuto di mannosio legato all'N dalle glicoproteine.
La nostra azienda offre attualmente Endo H espresso ricombinante nel lievito (Cat#20414ES).
Endo S è una glicosidasi altamente specifica che può scindere gli zuccheri N-linked tra le strutture del nucleo chitobiosio delle catene pesanti IgG di tipo selvatico. L'attività della glicosidasi S non dipende strettamente dal peptide, quindi X può essere una proteina, un peptide, un'asparagina o un oligosaccaride libero. La glicosidasi S è attiva indipendentemente dalla presenza di fucosio alfa1-6 del nucleo o di N-acetilglucosamina bisecante sul substrato. Tuttavia, è inattiva contro gli oligosaccaridi che sono sialilati e desialilati tri- o tetra-antennari.
La nostra azienda offre attualmente Endo S ricombinante espresso da E. coli (Cat#20413ES).
Guida all'acquisto
| Numero del prodotto | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Nome del prodotto | ||||
| Fonte | Espressione ricombinante del lievito | Espressione ricombinante del lievito | Espressione ricombinante del lievito | E.coli espressione ricombinante |
| Attività specifica | Non applicabile | 100000U/ml | 1000000U/ml | 8000 unità/mg |
| Sito di scissione | Quasi tutti i glicani N-legati | Quasi tutti i glicani N-legati | Glicani ad alto contenuto di mannosio N-linked | Scinde all'interno della struttura disaccaridica centrale della catena pesante dell'IgG |
| Tempo di digestione | 10 minuti | 1-3 ore | 1-3 ore | 1 ora |
| Glicosilazione | Adatto | Adatto | Adatto | Adatto |
| Struttura proteica | Adatto | Adatto | Adatto | Adatto |
Dati di prova
1. PNGase veloce F Test
1: Marcatore proteicoCat#20350ES) 2: Competitore + substrato o anticorpo 3: Competitore + substrato o anticorpo
4: Yeasen Fast PNGase F + substrato o anticorpo 5: Yeasen Fast PNGase F + substrato o anticorpo 6: Substrato o anticorpo 7: Yeasen Fast PNGase F 8: Competitore
2.Test Endo H
Figura 2. Endo H effetto di scissione enzimatica (substrato)
3.Test Endo S
Informazioni sul prodotto
| Nome del prodotto | Numero di prodotto | Specificazione |
| 20406ES20/50 | 20 tonnellate/50 tonnellate | |
| 20407ES01/02 | 15000 unità /75000 unità | |
| 20414ES92/97 | 10000 unità /50000 unità | |
| 20413ES80/90 | 1000 unità/5 x 1000 unità |