Descrizione di base

La purificazione delle proteine ​​è il processo di isolamento della proteina target dalle proteine ​​totali nel campione sperimentale, mantenendo comunque l'attività biologica e l'integrità chimica della proteina target. Durante la costruzione dei vettori, oltre ad alcuni elementi di espressione necessari, è anche necessario considerare l'ottimizzazione dei codoni e la scelta dei tag. La scelta del tag giusto non è solo vantaggiosa per la purificazione delle proteine ​​e la promozione della solubilità delle proteine, ma non dovrebbe influenzare la struttura e la funzione della proteina e le applicazioni a valle. Questa sezione si concentra sull'introduzione dei tag His e GST.

Tabella 1. Introduzione al suo tag GST

Etichetta	Dimensioni kDa	Sequenza	Purezza	Solubilità	Rimozione tag	Enzima di scissione dei tag
Il suo	~0,84	AHH ...	+	+	Non richiesto	Proteasi TEV
IVA	26	Composto da 211 aminoacidi	++	++	Necessario	3C Proteasi/PSP

La sua purificazione dell'affinità proteica del tag

La resina di agarosio HisSep Ni-NTA si basa su un gel di agarosio altamente reticolato come matrice, accoppiato chimicamente con acido nitrilotriacetico tetracoordinato (NTA) come legante e dopo la chelazione degli ioni nichel (Ni²⁺), forma una struttura ottaedrica molto stabile con ioni nichel al centro dell'ottaedro. Questa struttura può proteggere gli ioni nichel dagli attacchi di piccole molecole. Rispetto alla resina Ni-IDA, è più stabile e può resistere a determinate concentrazioni di agenti riducenti, agenti denaturanti o agenti accoppianti in condizioni difficili. Rispetto alla resina Ni-TED, ha una maggiore capacità di adsorbimento per le proteine ​​target. È diventata una delle resine indispensabili per la purificazione delle proteine ​​marcate His nei laboratori.

Figura 1. Diagramma del principio di produzione della resina His.

Tabella 2. Sììì La sua guida alla selezione dei prodotti di purificazione

Numero di prodotto	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Nome del prodotto	Resina di agarosio Ni-NTA HisSep	Resina di agarosio HisSep Ni-NTA 6FF	Colonna per cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 5 ml/1 ml	HisSep Ni-NTA MagBeads
Matrice	Gel di agarosio reticolato al 6%	Gel di agarosio altamente reticolato al 6%	Gel di agarosio altamente reticolato al 6%	Microsfere di agarosio magnetiche
Resistenza alla pressione	0,1 MPa, 1 sbarra	0,3 MPa, 3 sbarra	0.3 MPa, 3 sbarra	N / A
Capacità	>40 mg 6×proteina marcata con His/mL matrice	>40 mg 6×proteina marcata con His/mL matrice		> 40 mg 6×proteina marcata con His/mL sfere magnetiche
Suggerimento per la purificazione	Matrice con resistenza media alla pressione, adatto per il metodo di incubazione, purificazione su piccola scala con colonna di gravità	Matrice con elevata resistenza alla pressione, può essere utilizzata per la purificazione industriale delle proteine ​​su larga scala con strumento di purificazione delle proteine		Purificazione proteica rapida e conveniente tramite separazione magnetica
Tolleranza	8 M di urea, 6 M di acido cloridrico, 0,5-1 mM di DTT, 1 mM di EDTA, ecc.
Applicazione	La purificazione delle proteine ​​con tag His è la prima scelta, carico elevato, tolleranza media, particolarmente adatta per il sistema di purificazione dell'espressione procariotica

Appendice: Caratteristiche del prodotto HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES).

1. Rispetto alle tradizionali colonne preconfezionate e resine, non è necessario centrifugare più volte i campioni né controllare la portata del campione, riducendo notevolmente i tempi di purificazione.
2. La purificazione in un'unica fase può raggiungere una purezza superiore al 95% della proteina target.
3. Elevata resa proteica target: la resa può raggiungere il 70-80%.
4. Può essere riutilizzato fino a 5 volte.
5. Facile regolazione della concentrazione e del volume della proteina target.
6. Piccola perdita di proteine ​​e nessun rischio di denaturazione o precipitazione delle proteine.

Terreno di purificazione per affinità proteica con tag GST

La cromatografia di affinità proteica con tag GST sfrutta l'affinità covalente tra la proteina di fusione GST e il glutatione fisso (GSH) tramite legami di zolfo e purifica in base al principio di eluizione dello scambio GSH. In questa purificazione, un glutatione viene combinato con il braccio del gel tramite un legame di zolfo, quindi la forza di azione specifica tra glutatione e glutatione S-transferasi (ovvero, tag GST) viene utilizzata per far sì che la proteina di fusione con tag GST si unisca al glutatione del braccio sul gel, separando così la proteina marcata dalle altre proteine. Il glutatione di solito ha la forma ossidata GSSG e la forma ridotta GSH. Quando utilizziamo l'eluizione GSH, GSH competerà con il glutatione del gel per combinarsi con la proteina di fusione, eluendo così la proteina target.

GSTSep Glutathione Agarose Resin è una resina di purificazione delle proteine ​​tag GST, strutturalmente realizzata combinando chimicamente in modo covalente il glutatione ridotto con il 6% di gel di agarosio come matrice attraverso un braccio da 12 atomi. Questo design ha notevolmente migliorato l'efficienza di purificazione della resina, consentendole di trasportare più di 20 mg di proteine ​​di fusione GST per millilitro di mezzo. Il prodotto ha una buona specificità e un buon rapporto costi-prestazioni e può essere utilizzato per purificare varie glutatione S-transferasi, proteine ​​dipendenti dal glutatione e derivati ​​ricombinanti del glutatione in un unico passaggio.

Tabella 3. Sììì Guida alla selezione dei prodotti di purificazione GST

Numero di prodotto	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Nome del prodotto	Resina di agarosio di glutatione GSTSep	Resina di agarosio di glutatione GSTSep 4FF	Colonna cromatografica GSTSep Glutatione 4FF, 1 mL / 5 mL	GSTSep Glutatione PerlineMag
Matrice	Gel di agarosio reticolato al 6%	Gel di agarosio altamente reticolato al 4%	Gel di agarosio altamente reticolato al 4%	Microsfere di agarosio magnetiche
Resistenza alla pressione	0,1 MPa, 1 sbarra	0,3 MPa, 3 sbarra	0,3 MPa, 3 sbarra	N / A
Capacità	>20 mg di proteina GST (40 kDa)/mL di matrice	>10 mg di proteina GST (40 kDa)/mL di matrice		5-10 mg di proteina di fusione del tag GST/mL di sfere magnetiche
Applicazione	Carico elevato, matrice con resistenza media alla pressione, adatto per il metodo di incubazione, purificazione su piccola scala con colonna di gravità, consigliato per clienti su scala di laboratorio	Applicazione Carico basso, elevata resistenza alla pressione della matrice, può essere utilizzato per la purificazione di proteine ​​su larga scala industriale con strumento di purificazione delle proteine, più facile da aumentare		Purificazione delle proteine ​​con il carico più basso, veloce e conveniente tramite separazione magnetica

Appendice: Caratteristiche del prodotto GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES)

1. Purifica direttamente proteine ​​target ad elevata purezza da campioni biologici tramite separazione magnetica in un unico passaggio, semplificando notevolmente il processo di purificazione e migliorandone l'efficienza, adatto per una comoda purificazione delle proteine ​​di fusione GST nella ricerca scientifica e nei settori industriali.
2. Utilizzando questa biglia magnetica per gli esperimenti GST Pull-down, poiché la separazione magnetica non richiede centrifugazioni multiple e lunghi tempi di incubazione, l'operazione risulta più semplice, più rapida e più automatizzata rispetto ai metodi cromatografici tradizionali.

Informazioni sul prodotto

Posizionamento del prodotto	Nome del prodotto	Numero di prodotto	Specificazione
La sua purificazione proteica Tag	HisSep Ni-NTA Agarosio Resina	20502ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	HisSep Ni-NTA Agarosio Resina 6FF	20503ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Colonna per cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 5 mL	20504ES08/25	5 ml/5x5 ml
	Colonna per cromatografia HisSep Ni-NTA 6FF, 1 ml	20505ES03/08	1 ml/5x1 ml
	HisSep Ni-NTA MagBeads	20561ES08/25	5 ml/25 ml
Purificazione delle proteine ​​con tag GST	Resina di agarosio di glutatione GSTSep	20507ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Resina di agarosio di glutatione GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 ml/50 ml/100 ml
	Colonna cromatografica GSTSep Glutatione 4FF, 1 mL	20509ES03/08	1 ml/5x1 ml
	Colonna cromatografica GSTSep Glutatione 4FF, 5 mL	20510ES08/25	5 ml/5x5 ml
	MagBeads di glutatione GSTSep	20561ES08/25	5 ml/25 ml