Scenari di applicazione del prodotto

1. Rimozione degli acidi nucleici residui nei prodotti biologici: durante la produzione di prodotti biologici, come virus, vaccini e proteine, è possibile aggiungere UltraNuclease per degradare gli acidi nucleici residui. Questo passaggio non solo aumenta la resa dei virus, ma riduce anche significativamente il contenuto di acidi nucleici residui, garantendo così la sicurezza e l'efficacia dei farmaci.
2. Riduzione della viscosità: degradando gli acidi nucleici, si riduce la viscosità dei lisati cellulari, facilitando i processi di filtrazione/ultrafiltrazione durante la purificazione di particelle derivate dalle cellule, come virus, vettori AAV e corpi di inclusione.
3. Risoluzione e recupero migliorati: nelle analisi ELISA, elettroforesi bidimensionale e immunoblotting, migliora la risoluzione e il recupero.
4. Prevenzione dell'aggregazione cellulare: UltraNuclease può prevenire efficacemente l'aggregazione delle cellule mononucleate del sangue periferico umano (PBMC).

L'effetto delle diverse condizioni di reazione sull'attività enzimatica

Per esplorare le condizioni operative ottimali per UltraNuclease, abbiamo studiato gli effetti di vari sistemi tampone sull'attività enzimatica.

Analisi comparativa dei prodotti concorrenti (dall'azienda A)

Le prestazioni dell'UltraNuclease sono coerenti con quelle della Società A e possono ottenere un effetto sostitutivo.

Lo standard di controllo qualità è conforme allo standard di produzione GMP

Elementi di rilevamento	Standard di qualità	Metodo di rilevamento
Attività enzimatica	250-300 unità/litro	Metodo del substrato universale
Attività specifica	≥1.5×106 Unità/mg	Metodo del substrato universale
Purezza delle proteine	≥99%	SDS-PAGINA
Proteasi	Soddisfa i requisiti	Metodo del substrato universale
Endotossina batterica	Soddisfa i requisiti	Metodo del gel
Proteina ospite	Negativo	Metodo ELISA
DNA ospite	Negativo	Metodo qPCR
Test sterili	Crescita sterile	Regola generale 1101
Rilevamento del patogeno	Negativo (non rilevato)	Fare riferimento al metodo interno
Test del micoplasma	Negativo (non rilevato)	Fare riferimento al metodo interno
Test sui metalli pesanti	Soddisfa i requisiti	Regola generale 0821

Per abbinare l'uso di UltraNuclease, Yeasen ha anche sviluppato in modo indipendente uno specifico kit di rilevamento per UltraNuclease, che può rilevare efficacemente l'enzima residuo e ridurre i rischi. Il kit di rilevamento residuo Yeasen UltraNuclease è stato sviluppato in riferimento alle linee guida di convalida del metodo analitico della Farmacopea cinese <9101> del 2020 e segue rigorosamente i requisiti chiave per i test multiparametrici (intervallo lineare, specificità, accuratezza, precisione, sensibilità, stabilità accelerata, ecc.).

Rilevamento di ultranucleasi residua

Nelle normali fasi di purificazione, UltraNuclease viene facilmente rimosso come impurità. Per rilevare la quantità residua specifica di UltraNuclease onnipotente, viene spesso utilizzato come prodotto standard nel settore e viene sviluppato un kit ELISA corrispondente.

L'UCF.ME® Ultranucleasi Il kit ELISA sviluppato indipendentemente da Yeasen adotta il principio del sandwich immunoenzimatico a doppio anticorpo (sandwich ELISA), che può rilevare con precisione la quantità residua di UltraNuclease nei campioni. Il kit è stabile in linearità, ripetibilità, tasso di recupero e specificità.

Principio del kit Yeasen UltraNuclease ELISA (test immunoenzimatico a due siti)

Caratteristiche del prodotto:

Conformità normativa: completamente convalidato secondo i requisiti normativi, sono disponibili report di convalida; Garanzia di qualità: tutte le materie prime per il kit sono sviluppate in modo indipendente, garantendo il controllo di qualità;

Elevata sensibilità: limite quantitativo basso fino a 23.5 pg/ml;

Elevata precisione: elevata ripetibilità intra-lotto e bassa variabilità inter-lotto;

Forte specificità: nessuna reattività crociata con altre proteine ​​cellulari ingegnerizzate

Parametri di prestazione:

Parametri del prodotto	contenuto
Tempo di analisi	3,5 ore
Principio di analisi	Test immunoenzimatico a due siti
Amplificazione del segnale	Sistema biotina-streptavidina
Lunghezza d'onda di rilevamento	450nm e 630nm
Sensibilità	23,5 pg/ml
Campo di rilevamento	0,047~3 ng/mL
Oggetto di rilevamento	Ultranucleasi
Strumento applicabile	Dispositivi molecolari: serie M e i
Applicazione	Rilevamento di UltraNucleasi residua nei processi di purificazione di vaccini cellulari e genici e di vaccini virali adeno-associati ricombinanti

Dati del prodotto:

Curva standard del kit reagente:

Esperimento di recupero del campione effettivo:

UltraNuclease è stato addizionato in soluzioni di lisi cellulare da 5 μg/mL (HEK293, E. coli, CHO e Vero) indipendentemente con una concentrazione finale addizionata di 1,5 ng/mL. L'accuratezza in diversi campioni cellulari si è dimostrata eccellente rispetto ad altri fornitori.

Dimostrazione di specificità

Conclusione: il kit di test ha un'elevata specificità senza reazioni crociate; confronti a coppie, "*" Differenza significativa dal campione negativo; “NS” Nessuna differenza significativa rispetto al campione negativo.

Precisione:

Ripetibilità:

Concentrazione ng/mL	6 date duplicate nella stessa piastra						Valore CV
3	2.412	2.390	2.323	2.367	2.476	2.291	2,53%
1.5	1.780	1.883	1.884	1.908	1.876	1.883	2,19%
0,75	1.123	1.215	1.166	1.183	1.140	1.109	3,12%
0,375	0,691	0,706	0,708	0,722	0.722	0,679	2,21%
0,1875	0,449	0,462	0,453	0,460	0,447	0,433	2,13%
0,094	0,306	0,308	0,304	0,311	0,295	0,302	1,65%
0,047	0,242	0,241	0,240	0,241	0,256	0,240	2,37%
0	0,183	0,192	0,189	0,187	0,189	0,189	1,43%

Conclusione: sono stati testati 6 duplicati a ciascuna concentrazione sulla curva standard e tutti i CV% erano inferiori al 5%.

Precisione intermedia:

Precisione intermedia
Concentrazione del campione	1,5 ng/ml	0,375 ng/mL	0,094 ng/mL
Analista 1	1.388	0,382	0,079
Analista 2	1.458	0,363	0,068
Analista 3	1.318	0,37	0,063
Media	1.388	0,372	0,07
Deviazione standard	0,070	0,010	0,008
Valore CV	5,04%	2,59%	11,69%

3 analisti hanno condotto l'esperimento UCF.ME™ UltraNuclease ELISA e il CV% era inferiore al 15%

Informazioni sul prodotto:

Nome del prodotto	Prodotto numero	Specifiche del prodotto
UCF.ME®UltraNuclease GMP-grade (Benzonasi)	20157ES25/50/60/80/90	25KU/50KU/100KU/1MU/5MU
Università della Florida.Kit ELISA ME® UltraNuclease	36701ES59	96T

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