Hieff Canace^TM Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase è una nuova generazione di DNA ad alta fedeltà Polimerasi basata sulla DNA polimerasi Pfu. La Hieff Canace^TM La DNA polimerasi ad alta fedeltà Uracil+ consente reazioni PCR rapide e accurate per modelli complessi. La sua fedeltà è notevolmente migliorata ed evita completamente il fallimento dell'amplificazione causato dall'uso di primer/modelli/dNTP contenenti dUTP. Il prodotto è dotato di un tampone enzimatico ottimizzato e dell'aggiunta di componenti che migliorano la PCR, rendendo l'enzima altamente efficiente e adattabile a un'ampia gamma di modelli, adatto per l'amplificazione di modelli complessi.

Componenti del prodotto

Spedizione e stoccaggio

I componenti vengono spediti con ghiaccio e possono essere conservati a -20°C per 1 anno.

Applicazione del prodotto

Amplificazione della libreria ad alta fedeltà mediante primer/template/dNTP contenenti dUTP.

Attenzione

1. Per la vostra sicurezza e salute, vi preghiamo di indossare camici da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

2. Solo per uso di ricerca!

Istruzioni

Hieff Canace^TM La DNA polimerasi Uracil+ High-Fidelity viene utilizzata in un modo leggermente diverso rispetto agli enzimi convenzionali ad alta fedeltà. Si prega di leggere attentamente le istruzioni prima dell'uso.

1. Sistema di reazione consigliato

Tutte le operazioni devono essere eseguite sul ghiaccio. 2×Canace^TM Il tampone Uracil+ PCR deve essere ben miscelato dopo lo scongelamento. Prima della configurazione del sistema, preriscaldare lo strumento PCR. Dopo l'aggiunta dei componenti, miscelare bene il campione con una pipetta e centrifugarlo fino al fondo della provetta, quindi posizionarlo nello strumento PCR preriscaldato per l'amplificazione. Dopo l'uso, riportare tutti i componenti a -20 °C per la conservazione.

Tabella 1. Reazione di amplificazione PCR

[Note]:

1) Reagenti: scongelare sufficientemente ogni componente prima dell'uso;

2) Modelli: l'uso di modelli di DNA purificati di alta qualità può migliorare significativamente l'efficienza e il tasso di successo dell'amplificazione;

3)dNTP: la concentrazione finale di dNTP raccomandata è di 200 μM. I dNTP forniti nel kit non contengono dUTP. Se circostanze speciali richiedono la preparazione di modelli contenenti dUTP, è possibile aggiungere ulteriore dUTP fino a una concentrazione finale di 400 μM.

4) Concentrazione della polimerasi: si consiglia 1 U/50 μL. Può essere ottimizzata tra 0,5-2 U/50 μL, non superare 2 U/50 μL. Per evitare che la polimerasi degradi i primer a causa dell'attività dell'esonuclide 3 '→5', si consiglia di aggiungere la polimerasi al sistema di reazione nell'ultimo passaggio.

5) Concentrazione finale di Mg2+: la concentrazione finale del sistema è 2 mM. Chiedete alla nostra azienda di fornirvi un tampone con bassa concentrazione di Mg2+ o senza Mg2+ se avete esigenze particolari.

2. Procedura di reazione consigliata

Tabella 2. Procedura di reazione di amplificazione PCR

[Note]:

1)Temperatura e tempo di denaturazione iniziale: si raccomandano 98℃. Il tempo raccomandato è di 30 sec per modelli semplici come il DNA plasmidico, 1 min per le librerie, 3 min per modelli complessi come cDNA e DNA genomico e 5-10 min per modelli ad alto contenuto di GC.

2)Temperatura e tempo di ricottura: si consigliano 60℃, oppure è possibile impostare un gradiente di temperatura per trovare la temperatura ottimale per la ricottura del primer in base alle esigenze. Il tempo di ricottura consigliato è di 20 sec e può essere regolato entro 10-30 sec. Un tempo di ricottura troppo lungo può portare alla dispersione dei prodotti amplificati sul gel.

3)Temperatura e tempo di estensione: si consiglia 72℃. Il tempo di estensione viene regolato in base alle effettive esigenze.