Descrizione
Plant tissue direct PCR kit è un kit che può amplificare direttamente diversi tipi di foglie di piante tramite PCR, con ampia adattabilità e forte stabilità. Il kit utilizza un esclusivo sistema di tampone di lisi, che può lisare rapidamente una varietà di campioni di piante e rilasciare DNA genomico. Il DNA genomico rilasciato può essere utilizzato direttamente come modello senza rimuovere proteine, RNA o metaboliti secondari nella reazione PCR. Inoltre, il kit richiede una piccola quantità di campione, fino a 1 mm di foglie di piante possono essere utilizzate per gli esperimenti.
Il 2×Plant Master Mix fornito in questo kit ha una forte compatibilità di amplificazione e può usare direttamente il lisato del campione come modello per un'amplificazione efficiente e specifica. Questo reagente è una miscela di reazione PCR concentrata 2 volte, che contiene tutti i componenti usati per l'amplificazione PCR eccetto il modello e i primer, il che semplifica notevolmente il processo operativo e riduce la possibilità di contaminazione.
Il kit può essere utilizzato per l'identificazione di piante transgeniche, la genotipizzazione delle piante, ecc.
Spedizione
I prodotti vengono spediti con ghiaccio.
Magazzinaggio
1. Il reagente 10187-A [Buffer P1] può essere conservato a 4℃ per 1 anno.
2. Reagente 10187-B [Buffer P2], utilizzato per neutralizzare il lisato, che è utile per conservare il campione per un periodo di tempo più lungo e può essere conservato a 4℃ per 1 anno.
3. Il reagente 10187-C [2× Plant Master Mix] può essere conservato a -20℃ per 1 anno. Evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
Attenzione
1. Quando si eseguono esperimenti sulle foglie, si consiglia di utilizzare tessuto fogliare appena raccolto. Se si tratta di tessuto congelato a lungo termine, deve essere conservato a -80°C. Si dovrebbero evitare il più possibile ripetuti congelamenti e scongelamenti per evitare la degradazione del modello e compromettere l'efficienza della PCR. Il tessuto fogliare è adatto per foglie giovani. Se si tratta di una foglia matura, evitare di utilizzare il tessuto della vena principale della foglia.
2. Si consiglia di amplificare il frammento entro 1 kb di lunghezza per la migliore efficienza di amplificazione.
3. Durante il campionamento, utilizzare un perforatore o un coltello per prendere un campione di dimensioni adatte. Quando i campioni sono diversi, il perforatore o il coltello devono essere puliti ogni volta prima di elaborare il campione.
4. Per il tessuto fogliare, si consiglia di prendere foglie da 1-10 mm, una lunghezza fogliare troppo piccola porterà a una bassa resa di amplificazione PCR, una lunghezza eccessiva inibirà la reazione PCR, utilizzare il metodo di cracking termico, schiacciamento con una punta di pipetta e frantumazione con un macinino per trattare le foglie delle piante. Dopo il trattamento, deve essere agitato e centrifugato. Assicurarsi di prendere il surnatante per il test. La precipitazione inibirà seriamente la reazione PCR.
5. Per la vostra sicurezza e salute, vi preghiamo di indossare camici da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.
6. Questo prodotto è SOLO per uso di ricerca!
| Problemi comuni | Possibili cause | Soluzioni |
| Non sono state rilevate bande nel controllo positivo e nei campioni da analizzare. | Il sistema di reazione PCR o le condizioni di reazione non erano adatti. | Utilizzare la PCR a gradiente per esplorare le condizioni di reazione ottimali per la PCR. |
| La conservazione impropria dei reagenti PCR li inattiva. | 2×PCR Mix deve essere conservato a -20℃, evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti durante l'uso. Se usato frequentemente, può essere conservato a 4°C per un breve periodo. | |
| Problemi di progettazione del primer. | Prova a riprogettare i primer per verificarlo. | |
| Il controllo positivo presenta una banda di interesse, mentre il campione da analizzare non presenta alcuna banda oppure presenta una banda debole. | Il rapporto tra tampone di lisi e tampone di neutralizzazione non è appropriato e la miscela di lisi influirà sul valore del pH del sistema PCR. | In condizioni normali, il pH della miscela di lisi neutralizzata dovrebbe essere intorno a 7-8 (il prodotto di lisi e il tampone P2 dovrebbero essere neutralizzati rispettando rigorosamente il rapporto di 5:1). |
| La miscela di lisi del campione è stata conservata in modo improprio o per troppo tempo e il genoma del DNA è stato degradato. | La miscela del lisato può essere conservata a 4°C per 5 giorni; per la PCR, provare a utilizzare una miscela del lisato appena preparata. | |
| La quantità di modello aggiunta non è adeguata. | Ottimizzare la quantità di modello aggiunto entro un intervallo <5% del sistema di reazione. | |
| Numero insufficiente di cicli PCR. | Aumentare opportunamente il numero di cicli di PCR, preferibilmente 35-40 cicli. A causa della complessità del modello, è generalmente meglio utilizzare 5-10 cicli in più di reazione PCR rispetto all'utilizzo di un modello di DNA purificato. | |
| Amplificazione non specifica | Temperatura di annealing della PCR troppo bassa, numero di cicli, concentrazione del primer o concentrazione del modello troppo alti. | Aumentare la temperatura di annealing della PCR e diminuire il numero di cicli della PCR, la concentrazione del primer o la concentrazione del modello. |
| Mancata corrispondenza dei primer PCR. | Riprogettare i primer PCR. | |
| La temperatura è troppo alta durante la preparazione del sistema di reazione PCR oppure il tempo impiegato è troppo lungo dopo la preparazione. | La preparazione del sistema di reazione PCR viene effettuata a bassa temperatura e la reazione di amplificazione PCR viene eseguita il prima possibile dopo il completamento della preparazione. | |
| La banda target appare nel controllo negativo | Contaminazione degli strumenti operativi o dei reagenti. | Tutti i reagenti e le attrezzature utilizzati nell'esperimento devono essere autoclavati.Usare cautela e delicatezza durante la manipolazione per evitare che la sequenza target venga aspirata nella pistola di campionamento o fuoriesca dalla provetta da centrifuga. |
| Contaminazione incrociata tra campioni. | Ogni campionatore viene utilizzato per un solo campione; in alternativa, dopo aver prelevato un campione, immergere la lama del campionatore in una soluzione di ipoclorito di sodio al 2%, risciacquare ripetutamente e quindi asciugare il residuo con un tovagliolo di carta pulito. |
Pagamento e sicurezza
Le informazioni di pagamento vengono elaborate in modo sicuro. Non archiviamo i dettagli della carta di credito né abbiamo accesso alle informazioni sulla tua carta di credito.
Indagine
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FAQ
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