Descrizione
Il kit Hieff® Blood Advanced Direct PCR è un kit in grado di amplificare direttamente campioni di sangue intero senza purificazione del DNA o pretrattamento del campione ed è compatibile con sangue fresco, sangue refrigerato (congelato) e macchie di sangue essiccato commerciali contenenti anticoagulanti convenzionali come EDTA, eparina, citrato, ecc. Il kit contiene una combinazione di DNA polimerasi geneticamente modificata con elevata fedeltà e resistenza agli inibitori della PCR, 2× Hieff® Blood Advanced PCR Buffer con forte fattore di allungamento, fattore di potenziamento dell'amplificazione e sistema tampone ottimizzato per amplificare in modo efficiente 8 kb di frammenti genomici in condizioni di estensione rapida e impostare un tempo di estensione di 3-5 sec/kb per frammenti inferiori a 2 kb, riducendo così significativamente il tempo di identificazione e analisi del campione di sangue.
Specifiche
| Fedeltà (contro Taq) | 1 × |
| Avvio a caldo | SÌ |
| Sporgenza | 3'-Un |
| Polimerasi | Taq DNA polimerasi (Cat: 10726) |
Componenti
| NO. | Nome | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Tampone PCR avanzato del sangue | 500 ioL | 2,5 ml |
| 10188-B | Capo® Miscela avanzata di DNA polimerasi ad alta fedeltà | 20 ioL | 100 microlitri |
| 10188-C | Miscela di primer di controllo positivo (10 μM ciascuno) | 100 microlitri | 200 microlitri |
| 10188-D | Tampone di caricamento del DNA 10× | 1 ml | 1 ml |
Istruzioni
Sistemi di reazione PCR consigliati.
| Componenti | Volume（μL） |
| ddH2Lo | fino a 50 μL |
| 2× Hieff® Tampone PCR avanzato del sangue | 25 microlitri |
| Primer diretto (10 μM) | 2 microlitri |
| Primer inverso (10 μM) | 2 microlitri |
| Capo® Miscela avanzata di DNA polimerasi ad alta fedeltà | 1 μL |
| Campione di sangue | X |
2. Si raccomanda una concentrazione finale di 0,4 μM per primer; una concentrazione troppo alta determinerà un'amplificazione non specifica.
3. La concentrazione ottimale del modello di sangue intero varia dallo 0,5% al 20% e l'uso raccomandato è del 10% come condizione di prova iniziale, ovvero vengono aggiunti 5 μL di sangue intero come modello al sistema di reazione da 50 μL, facendo attenzione a non aspirare coaguli di sangue. Per le macchie di sangue essiccato conservate su carte filtro Whatman®, è possibile prelevare circa 1 mm2 di pezzi di carta rotondi con macchie di sangue e amplificarli direttamente nella reazione PCR senza pretrattamento.
Programma di reazione
| Ciclo fare un passo | Temperatura | Tempo | Cicli |
| Denaturazione iniziale | 95℃ | 5 minuti | 1 |
| Denaturazione | 95℃ | 15 secondi | 30-35 |
| Ricottura | 60℃ | 15 secondi | |
| Estensione | 72℃ | 3-10 secondi/kb | |
| Finale estensione | 72℃ | 5 minuti | 1 |
La temperatura di annealing è un valore Tm generico o 1-2°C al di sotto del valore Tm del primer. Se il prodotto di amplificazione è meno specifico, è possibile stabilire un gradiente di temperatura di annealing per trovare le condizioni di annealing ottimali.
Un tempo di estensione di 10 sec/kb può amplificare la maggior parte dei frammenti target al di sotto di 8 kb, e 3-5 sec/kb possono amplificare la maggior parte dei frammenti al di sotto di 2 kb. Se l'efficienza di amplificazione è bassa, il tempo può essere opportunamente esteso a 20-30 sec/kb, e non dovrebbe superare i 60 sec/kb.
Spedizione e stoccaggio
I prodotti devono essere conservati a -15℃ ~ -25℃ per 1 anno
Cifre
Appunti
1. Si raccomanda di utilizzare il modello sanguigno pari al 10% del volume totale di reazione, ovvero aggiungere 5 μL di sangue intero al sistema di reazione da 50 μL come modello, facendo attenzione a non aspirare coaguli di sangue.
2. Un tempo di estensione di 10 sec/kb può amplificare la maggior parte dei frammenti target al di sotto di 8 KB, e 3-5 sec/kb possono amplificare la maggior parte dei frammenti al di sotto di 2 KB. Se l'efficienza di amplificazione è bassa, il tempo può essere esteso a 30 sec/kb.
3. Dopo la reazione PCR, si raccomanda di centrifugare il prodotto della reazione a 4000 giri al minuto (1000× g) per 1-3 minuti per precipitare i frammenti delle cellule del sangue e prelevare il surnatante per l'analisi a valle.
4. Questo prodotto non può essere utilizzato direttamente per diagnosi mediche.
5. Per la vostra sicurezza e salute, indossate un camice da laboratorio e guanti monouso.
Pagamento e sicurezza
Le informazioni di pagamento vengono elaborate in modo sicuro. Non archiviamo i dettagli della carta di credito né abbiamo accesso alle informazioni sulla tua carta di credito.
Indagine
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