Quick T4 DNA Ligase è un prodotto enzimatico singolo che può essere utilizzato per la legatura di frammenti di DNA e adattatori nel processo di costruzione di librerie NGS. Questo prodotto è stato verificato tramite sequenziamento ad alto rendimento e ha una qualità eccellente. Per i clienti che non necessitano di una regolazione sperimentale del sistema, si consiglia di acquistare Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607).

Componenti del prodotto

Spedizione e stoccaggio

Il prodotto viene spedito con ghiaccio e può essere conservato a -20°C per due anni.

Definizione di unità

In un sistema di reazione di legatura da 20 μL, quando 6 μg di λDNA-Hind Ⅲ vengono fatti reagire a 16℃ per 30 minuti, la quantità di enzima necessaria per ottenere una legatura superiore al 50% dei frammenti di DNA è stata definita come una unità (U).

Attenzione

1. Se si verifica una piccola quantità di precipitazione durante la fusione del tampone, capovolgere e mescolare bene prima dell'uso;

2. Per la vostra sicurezza e salute, vi preghiamo di indossare camici da laboratorio e guanti monouso durante il funzionamento.

3. Questo prodotto è destinato ESCLUSIVAMENTE alla ricerca!

Istruzioni

1. Gli attuali kit di costruzione di librerie di DNA mainstream generalmente non vengono purificati dopo la riparazione delle estremità e il trattamento A-Tailing, ed eseguono direttamente la legatura dell'adattatore. Fare riferimento alla seguente preparazione per il sistema di reazione. Agitare a fondo, centrifugare brevemente e incubare per 15 minuti a 20°C.

[Nota]: *Il 50% di PEG 6000 non è incluso nel kit, è necessario prepararlo autonomamente.

**Per la quantità di adattatori, fare riferimento alla tabella seguente.

***La quantità di DNA ligasi Quick T4 utilizzata può essere aggiunta da 1 a 5 μL a seconda delle necessità.

2. La qualità e la concentrazione degli adattatori utilizzati influenzano direttamente l'efficienza della legatura e la resa della libreria. Un utilizzo eccessivo di adattatori può produrre più dimeri di adattatori, mentre un utilizzo inferiore può influenzare l'efficienza della legatura e la resa della libreria. La seguente tabella elenca la quantità consigliata di adattatori utilizzati in diverse situazioni di Input DNA utilizzando questo kit.

[Nota]: Mole di DNA di input (pmol) ≈ DNA di input (ng)/ [0,66 × lunghezza media del DNA di input (bp)].

Esempio di calcolo della legatura dell'adattatore: quanta quantità di adattatore deve essere aggiunta quando il DNA di input è di 100 ng e la lunghezza è di 300 bp?

Fase 1: Calcolare il numero di moli di DNA di input. Formula: Mole di DNA di input (pmol) ≈ DNA di input (ng) / [0,66 × lunghezza media del DNA di input (bp)]; Mole di DNA di input (pmol) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 pmol;

Fase 2: In base alla tabella sopra, calcolare il numero di moli di adattatore aggiunto.; Quando il DNA in ingresso è 100 ng, il rapporto molare tra adattatori e DNA in ingresso è 100:1 e il numero di moli di adattatori aggiunti = 100×0,5 pmol = 50 pmol;

Fase 3: Calcolare il volume di aggiunta dell'adattatore. Concentrazione dell'adattatore = 15 μmol/L (se si utilizza l'adattatore di un'altra azienda, è necessario determinare la sua concentrazione in base alle sue istruzioni); Volume dell'adattatore aggiunto = moli di adattatore aggiunto (50 pmol) ÷ concentrazione dell'adattatore (15 μmol/L) = 3,34 μL (Nota: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL);

Riassumendo, il volume a cui può essere aggiunto l'adattatore è 3,4 μL. (Nota: il volume massimo di aggiunta dell'adattatore non supera i 5 μL).