Descrizione
Questa è una variante ingegnerizzata della RNA polimerasi T7 (low dsRNA) derivata dalla RNA polimerasi T7 di tipo selvatico e prodotta in Escherichia coli. Riduce significativamente la produzione di RNA a doppio filamento (dsRNA) incorporando in modo efficiente analoghi del cap e esibendo una trascrizione in vitro (IVT) altamente efficiente, paragonabile alla RNA polimerasi T7 di tipo selvatico. Catalizza la sintesi 5'→3' dell'RNA sul DNA a doppio filamento dalla sua sequenza promotore T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') e utilizza gli NTP come substrati.
Nota: G* è la prima base della trascrizione dell'RNA.
Caratteristica
- Livello dsRNA inferiore a circa 1/100000
- Compatibile con Trilink CleanCap AG
- Elevate rese paragonabili a WT
- Ingresso Cap inferiore
- Senza origine animale (AOF)
Qui puoi trovare informazioni sullo sviluppo di questo enzima.
Componenti
| Componenti n. | Nome | 10628ES10 | 10628ES60 | 10628ES72 | 10628ES86 |
|
|
| (10 KU) | (100 KU) | (250 KU) | (2.500 KU) |
| 10628 | CleaScrip™ T7 RNA Polimerasi (dsRNA basso, 250 U/μL) | 40 microlitri | 400 microlitri | 1 ml | 10 ml |
Specifiche
| Fonte | Ricombinante Escherichia coli con gene T7 RNA Polimerasi |
| Temperatura ottimale | 37℃ |
| Buffer di archiviazione | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1% Triton X-100, 50% (v/v) glicerina, pH 7,9 a 25℃ |
| Definizione di unità | La quantità di enzima necessaria per incorporare 1 nmol di [3H] GMP nel precipitato insolubile in acido entro 1 ora a 37°C e pH 8,0 è definito come 1 unità. |
| Mg2+ consigliato | Acetato di magnesio 30 mM |
Controllo di qualità Standard
| IOtermini | Specifica/Standard |
| Enzima attività | 250-300U/μL |
| Purezza delle proteine | ≥95% |
| Endotossina | <20 UE/mg |
| Proteasi | Negativo |
| Esonucleasi | Negativo |
| Nicchia | Negativo |
| RNasi | Negativo |
| Proteina ospite E. coli | <50 ppm |
| Eospite .coli Il DNA | <10 fg/U |
| Esame del micoplasma | Negativo |
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Tris NTP che riducono sinergicamente dsRNA
Cifre
Figura 2. Valutazione dell'immunogenicità dei prodotti IVT nell'AR murinaW264.7 cellule (Figure 2A e 2B). I livelli di mRNA e proteine dell'IFN-β erano ridotti nell'ARW264.7 cellule transfettate con mRNA prodotto da mutanti rispetto a quelle di tipo selvatico, indicando che l'mRNA sintetizzato dal T7 RNAP di tipo selvatico ha suscitato la risposta immunitaria più forte, mentre l'mRNA dei mutanti ha mostrato una risposta significativamente ridotta.
Figura 3. Il contenuto di dsRNA nell'mRNA sintetizzato con l'RNA polimerasi CleaScript™ T7 è inferiore a quello nell'mRNA sintetizzato con l'enzima di tipo selvatico dopo il trattamento con cellulosa.
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Pubblicazione:
La RNA polimerasi T7 ingegnerizzata riduce la formazione di dsRNA abbassando le attività della transferasi terminale e della RNA polimerasi dipendente dall'RNA, The FEBS Journal 03 marzo 2025
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