LZCap AU (3'Acm) è un analogo del cap1. Il prodotto viene utilizzato per la trascrizione con la sequenza iniziale di 5'AU3', e la struttura cap1 naturale viene prodotta dal capping della trascrizione Cap1. Rispetto a Cap0 prodotto con il metodo di capping tradizionale, la struttura cap1 prodotta da CapAU (3'Acm) consente al SaRNA di avere un'attività e un'efficienza di traduzione più elevate in vivo.

Brevetto statunitense approvato.

Componenti

Dettagli del prodotto

LZCap^® Progettazione del modello del DNA

LZCap^®AU(3'Acm) è adatto per sequenze iniziate da AG. Come mostrato nella figura sottostante, il promotore T7 (sottolineato) seguito dalla sequenza AG può effettivamente iniziare la trascrizione.

Protocollo

1. Scongelare sul ghiaccio i componenti necessari per l'esperimento.

2. Fare riferimento al seguente sistema di reazione per configurare il sistema di trascrizione a temperatura ambiente.

L'N1-Me-pUTP modificato può essere utilizzato al posto dell'UTP di tipo selvatico. L'N1-Me-pUTP modificato riduce l'immunogenicità dell'mRNA. Henovcom può anche fornire il nucleotide modificato N1-Me-pUTP (Cat. No.: HN1002).

Note:

1)     LZCap^®AU(3'Acm) è adatto per il vettore di trascrizione del promotore T7 con 5 sequenze iniziate da 'AU 3', il che deve essere preso in considerazione durante la costruzione del vettore.

2)     I reagenti, i materiali di consumo e i contenitori utilizzati nell'esperimento sono privi di contaminazione da RNasi.

3)     Si raccomanda di utilizzare un modello di DNA linearizzato per la trascrizione.

4)     Quando sono stati utilizzati nucleotidi modificati al posto di nucleotidi di tipo selvatico, la concentrazione finale della reazione è rimasta invariata.

5)     Se il prodotto della PCR viene utilizzato come modello di DNA per l'inizio della trascrizione, la quantità di modello di DNA può essere ridotta della metà.

3． Miscelare la soluzione di reazione preparata, centrifugare brevemente e incubare a 37°C per 2-3 ore. Se la lunghezza del trascritto è inferiore a 100nt, aumentare il tempo di reazione a 4-8 h.

Profilo di sicurezza generale

Magazzinaggio

Questo prodotto può essere conservato a una temperatura compresa tra -25 e -15 ℃ per due anni.

Precauzioni

1. Per la vostra sicurezza e salute, quando utilizzate questo prodotto indossate sempre dispositivi di protezione individuale (DPI), come camici da laboratorio e guanti monouso.
2. Solo per uso di ricerca.
   

Domande e risposte

1. Come si progetta l'LZCap?

Gli enzimi hanno un riconoscimento relativamente "specifico" dei substrati. Pertanto, quando si progetta una nuova struttura di cap, da un lato, abbiamo bisogno di nuove modifiche strutturali per scopi di brevetto, ma dall'altro, ci sforziamo di mantenere la somiglianza con le strutture naturali/note il più possibile. La struttura naturale ha un ribosio 3' OH, che può essere modificato (ad esempio, metilazione). Sulla base di questa considerazione, abbiamo scelto di aggiungere un atomo di carbonio nella posizione 3' per la novità del brevetto, seguito da un NH per imitare il legame idrogeno di OH, e quindi un gruppo acetile per ridurre la basicità di NH e migliorare la sua capacità di legame idrogeno. L'attività di LzCap è meglio del metilatotappo naturale, probabilmente a causa dell'aumento del legame idrogeno. Rispetto ai gruppi metile e metossi, il gruppo acetilamino può anche aumentare le interazioni di van der Waals tra il substrato (cap) e il fattore di inizio (enzima).

2. Il gruppo acetilamino è stabile?

Il gruppo acetilamino è già sufficientemente stabile. È molto più stabile della posizione 7-metilata e del legame fosfodiesterico, che sono le parti meno stabili del cappuccio.

Per maggiori dettagli sulla licenza LZCap, contattateci.