Descrizione
I microRNA sono una classe di RNA non codificanti con una lunghezza di circa 22 nt, che svolgono un ruolo importante nella regolazione dell'espressione genica in piante e animali. Questo kit utilizza il metodo Poly(A)-tailing per eseguire la trascrizione inversa dal primo filamento di miRNA al cDNA. Il tampone RT miRNA 2×Hifair™ nel prodotto contiene tutte le materie prime e i primer per la reazione di Poly(A)-tailing di miRNA e la reazione di trascrizione inversa. Un'attenta ottimizzazione assicura che il processo di modifica di Poly(A) e il processo di trascrizione inversa possano essere eseguiti simultaneamente ed efficientemente nell'estremità 3' di miRNA.
Si consiglia di utilizzare questo prodotto insieme al nostro Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat#11171) per risultati sperimentali ottimali.
Caratteristiche
- Elevata sensibilità di rilevamento: è possibile rilevare 10 pg di RNA
- Elevata stabilità del prodotto: rimane inalterato a 37℃ per 7 giorni
Applicazione
- Il cDNA del primo filamento viene sintetizzato e può essere utilizzato come modello perr RT-PCR e RT-qPCR in tempo reale.
Specifiche
| Finale prodotto tipo | cDNA (primo filamento) |
| Metodo PCR | RT-PCR |
| Formato di reazione | Frazione isolata |
| Tipo di campione | microRNA |
| Temperatura di reazione ottimale | 37℃ |
| Inversione trascrittasi | MMLV |
Componenti
| Componenti n. | Nome | 11148ES50 (50T) |
| 11148-A | Alta qualità™ Miscela enzimatica miRNA RT | 87,5 μL |
| 11148-B | 2×Hifair™ Tampone miRNA RT | 250 microlitri |
| 11148-C | H senza RNasi2Lo | 10 ml |
| 11148-D | Primer inverso universale (10 μmol/L) | 4 ml |
| 11148-E | Primer di avanzamento U6 (10 μmol/L) | 500 microlitri |
| 11148-F | Primer inverso U6 (10 μmol/L) | 500 microlitri |
Magazzinaggio
Il prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25°C e -15℃ per 1 anno.
Cifre
Figura 1. Elevata sensibilità di rilevamento: è stato possibile rilevare 10 pg di RNA.
L'hsa-miR-let-7e-5p sintetizzato (a) e l'RNA totale delle cellule 293T (b) sono stati utilizzati come modelli e diluiti ai seguenti gradienti: da 60 copie a 606 copie (6 gradienti) e da 10 pg a 100 ng (5 gradienti). È stato rilevato tutto il cDNA del gradiente.
[1] Huang G, Chen J, Liu J, Zhang X, Duan H, Fang Q. Il ciclo di feedback MiR-935/HIF1α inibisce la proliferazione e l'invasività del glioma. Onco Targets Ther. 2020;13:10817-10828. Pubblicato il 23 ottobre 2020. doi:10.2147/OTT.S244409(IF:4.147)
[2] Li H, Pan R, Lu Q et al. Il microRNA‑145‑5p inibisce le cellule dell'osteosarcoma proliferazione prendendo di mira il fattore di trascrizione E2F 3. Int J Mol Med. 2020;45(5):1317-1326. doi:10.3892/ijmm.2020.4504(IF:4.101)
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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