Alta qualità™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) è un kit di trascrizione inversa rapida sviluppato sulla base di Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye), adatto per amplificazione PCR ed esperimenti RT-qPCR. Rispetto a Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis Kit (senza colorante), vanta tassi di rilevamento stabili, specificità e garanzia di resa, con un tempo totale di trascrizione inversa potenzialmente ridotto a meno di 6 minuti, riducendo significativamente la durata sperimentale.

Il kit include gDNA Digester Mix, che può eliminare la contaminazione del DNA genomico rimanente nel modello di RNA, garantendo risultati successivi più affidabili. Il kit fornisce due tipi di primer di sintesi del cDNA: Primer casuali N6 e Oligo (dT)₁₈Gli utenti possono scegliere tra Primer casuali N6, Oligo (dT)₁₈, o Gene Specific Primers come primer di trascrizione inversa in base alle loro esigenze. Il prodotto cDNA a singolo filamento sintetizzato può essere utilizzato direttamente per successive reazioni PCR o qPCR.

Specifiche

Componenti

Magazzinaggio

Questo prodotto deve essere conservato a -25~-15℃ per 1 anno.

Istruzioni

1. Se l'esperimento richiede la rimozione del DNA genomico residuo

1）Digestione del gDNA

In una provetta da centrifuga priva di RNasi, preparare la seguente miscela e pipettare delicatamente per mescolare bene. Incubare a 42℃ per 2 minuti.

* Si raccomanda che la quantità di input di RNA totale non superi i 2 μg. Se il livello di espressione del gene target è basso, la quantità di input può essere aumentata fino a un massimo di 5 μg di RNA totale.

2）Preparazione del sistema di reazione di trascrizione inversa (sistema da 20 μL)

* La quantità di primer può essere regolata in base alla quantità di input del template. Se il prodotto di trascrizione inversa viene utilizzato per esperimenti qPCR, è possibile aggiungere Random Primers nel sistema in base alla quantità consigliata.

** Si consiglia di aggiungere prima 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (senza colorante), mescolare bene e quindi aggiungere il primer di trascrizione inversa per assicurarsi che il primer non venga influenzato da gDNA Digester.

3）Impostazioni della procedura di trascrizione inversa

* Per modelli con elevato contenuto di GC o modelli complessi, la temperatura di trascrizione inversa può essere aumentata a 60℃.

** Questo prodotto può sintetizzare sequenze di cDNA inferiori a 14 kb. Se hai bisogno di prodotti cDNA più lunghi, puoi estendere opportunamente il tempo di trascrizione inversa.

2. Se l'esperimento non richiede la rimozione del DNA genomico

1）Preparazione del sistema di reazione di trascrizione inversa (sistema da 20 μL)

* Si raccomanda che la quantità di input di RNA totale non superi i 2 μg. Se il livello di espressione del gene target è basso, la quantità di input può essere aumentata fino a un massimo di 5 μg di RNA totale.

** La quantità di primer può essere regolata in base alla quantità di input del template. Se il prodotto di trascrizione inversa viene utilizzato per esperimenti qPCR, è possibile aggiungere Random Primers nel sistema in base alla quantità consigliata.

2) Impostazioni della procedura di trascrizione inversa

* Per modelli con elevato contenuto di GC o modelli complessi, la temperatura di trascrizione inversa può essere aumentata a 60℃.

** Questo prodotto può sintetizzare sequenze di cDNA inferiori a 14 kb. Se hai bisogno di prodotti cDNA più lunghi, puoi estendere opportunamente il tempo di trascrizione inversa.

Appunti

1. Tutte le operazioni devono essere eseguite sul ghiaccio e in modo da evitare la contaminazione da RNasi.
2. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
3. Per la vostra sicurezza, operate indossando camici da laboratorio e guanti monouso.

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