Descrizione
Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix per qPCR rappresenta un'iterazione migliorata di Hifair™ Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix per qPCR (gDNA Digester Plus). È progettato per soddisfare le esigenze di condurre sia reazioni di trascrizione inversa che di rimozione del genoma all'interno di un'unica provetta. Inoltre, semplifica il processo di reazione, riduce significativamente il tempo di reazione e aumenta la resa del prodotto di trascrizione inversa. Il 4×Hifair® AdvanceFast One-Step RT SuperMix comprende tutti i reagenti essenziali per la reazione di trascrizione inversa. Durante la reazione, è sufficiente integrarlo con gDNA Remover Mix, RNA stampo e acqua per sintetizzare in modo efficiente il filamento iniziale di cDNA eliminando contemporaneamente la contaminazione del DNA genomico. Questo prodotto è adatto per la trascrizione inversa di modelli di RNA intricati e si dimostra altamente efficace per la trascrizione inversa che coinvolge quantità scarse di modelli e geni a bassa copia.
Il prodotto di trascrizione inversa generato da questo particolare prodotto è completamente compatibile con entrambi i metodi qPCR basati su sonda e su colorante. Per qPCR basato su sonda, consigliamo di utilizzare Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (Cat#11211), mentre per qPCR basato su colorante, Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (Cat#11184) è la scelta consigliata per analisi di espressione genica ad alte prestazioni.
Tuttavia, è importante notare che il prodotto di trascrizione inversa prodotto da questo prodotto non è adatto per applicazioni successive come l'amplificazione di frammenti lunghi. Se hai bisogno di una trascrizione inversa efficiente per questi scopi, ti consigliamo di utilizzare il kit di sintesi cDNA Hifair® AdvanceFast 1st Strand (Cat#11149, Cat#11150).
Caratteristiche
- 5 minuti di RT
-
Digestione integrata di RT e gDNA in un'unica provetta
Applicazioni
- RT-qPCR
- Sintesi dell'RNA antisenso
Specifiche
| Tipo di prodotto finale | cDNA (primo filamento) |
| Metodo PCR | RT-PCR |
| Tipo di reagente | Trascrizione inversa |
| Tipo di campione | RNA |
| Temperatura di reazione ottimale | 37℃ |
| Trascrittasi inversa | M-MLV |
Componenti
| NO. | Nome | 11151ES10 (10T) | 11151ES60 (100 tonnellate) |
| 11151-A | 4×Alta qualità® AdvanceFast RT SuperMix in un solo passaggio | 50 microlitri | 500 microlitri |
| 11151-B | Miscela di rimozione gDNA | 10 microlitro | 100 microlitri |
| 11151-C | Acqua priva di RNasi | 1 ml. | 2×1 ml. |
Spedizione e stoccaggio
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a una temperatura compresa tra -15℃ e -25℃ per 12 mesi.
Istruzioni per l'uso
Scongelare i componenti 11151-A/B/C su ghiaccio, agitare delicatamente e mescolare accuratamente ogni componente del reagente. Quindi, assemblare quanto segue componenti all'interno di una provetta priva di RNasi:
| Componente | Volume (μL) |
| Senza RNasi Acqua | A 20 μL |
| 4×Alta qualità® AdvanceFast RT SuperMix in un solo passaggio | 5 microlitri |
| Miscela di rimozione gDNA | 1 μL |
| RNA totale | 10 pg -5 μg* |
| o mRNA | 10 pg-500 ng* |
Tabella 1: Preparazione della reazione
*Suggeriamo di non superare i 2 μg come quantità totale di input di RNA. In caso di bassa abbondanza di espressione del gene target, l'input totale di RNA può essere aumentato fino a un massimo di 5 μg.
| Temperatura | Tempo |
| 37℃ | 5 minuti* |
| 85℃ | 30 secondi |
Tabella 2: Protocolli di reazione
*Questo processo comprende sia la trascrizione inversa che la digestione del gDNA.
Il prodotto di trascrizione inversa è adatto per l'uso immediato nelle reazioni qPCR o può essere conservato a -20°C per un breve periodo. Per una conservazione prolungata, consigliamo di aliquotare e conservare a -80°C per evitare più cicli di congelamento-scongelamento.
Precauzioni:
1. Tutte le procedure devono essere eseguite su ghiaccio, con la massima cura per prevenire la contaminazione da RNasi.
2. Garantisci la tua sicurezza e il tuo benessere indossando un camice da laboratorio e guanti monouso.
3. Questo prodotto è destinato esclusivamente a scopi di ricerca scientifica e non deve essere utilizzato per altri scopi.
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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