I microRNA, una classe di RNA non codificanti con una lunghezza di circa 22 nt, sono ampiamente interessati e svolgono un ruolo molto importante nella regolazione dell'espressione genica nelle piante e negli animali. Questo kit utilizza il metodo di fluorescenza chimerica SYBR Green I per la rilevazione quantitativa della fluorescenza dei miRNA. Il 2×Hieff™ miRNA Universal qPCR Master Mix è una nuova generazione di reagente di rilevamento PCR quantitativo fluorescente premiscelato sviluppato appositamente per la rilevazione quantitativa dei miRNA. Contiene uno speciale colorante di riferimento passivo ROX. Adatto alla maggior parte degli strumenti qPCR, non è necessario regolare la concentrazione di ROX su strumenti diversi, basta aggiungere primer e modelli nella preparazione del sistema di reazione che può essere amplificato. La DNA Polimerasi utilizza una Polimerasi attivata dal calore modificata chimicamente, combinata con uno speciale sistema di buffer, per rendere la reazione più specifica, più sensibile e può essere quantificata accuratamente in un intervallo più ampio.
Si consiglia di utilizzare questo prodotto con il nostro kit di sintesi del cDNA a 1° filamento Hifair™ miRNA (Tailing) (Cat. n. 11148) per ottenere risultati sperimentali ottimali.

Caratteristiche

• Piattaforma completa: non è necessario modificare la concentrazione di ROX utilizzando colori premiscelati
• Elevata sensibilità di rilevamento: è possibile rilevare 10 pg di DNA
• Buone prestazioni di amplificazione: Eccellente efficienza di amplificazione
• Elevata specificità: in grado di distinguere le differenze di singole basi tra miRNA nella stessa famiglia

Applicazioni

• Espressione genica

Specifiche

Componenti

Magazzinaggio

Il prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25℃ e -15℃ per 1 anno.

Cifre

Figura 1. Buone prestazioni di amplificazione: eccellente efficienza di amplificazione.

I geni miR-let-7b-5p, miR-let-7c-5p, miR-let-7e-5p e miR-let-7f-5p sono stati amplificati utilizzando cellule umane 293T e RNA totale di fegato di topo come modelli.I risultati hanno mostrato che, rispetto a prodotti simili, il kit di sintesi del cDNA a 1 filamento Hifair™ miRNA (Cat# 11148ES) ha ottenuto risultati eccellenti con il sistema di reazione di Hieff™ miRNA Universal qPCR SYBR Master Mix (Cat# 11171ES).

Figura 2. Elevata specificità: capacità di distinguere le differenze di singole basi tra miRNA della stessa famiglia.

La famiglia umana hsa-let-7 ha più miRNA, con poche basi che differiscono tra loro, o anche solo una differenza di una base. Amplifica questi miRNA con diversi primer e usa la Formula 2- Δ CT x 100% tasso di corrispondenza calcolato. I risultati hanno mostrato che i membri della famiglia di sottotipi strettamente correlati potevano essere distinti in modo efficace.