Hieff UNICON™ ColorGPS qPCR Master Mix (High Rox) è una pre-soluzione per l'amplificazione PCR quantitativa in tempo reale 2×, caratterizzata da elevata intensità di fluorescenza, elevata sensibilità e specificità e alta resa di amplificazione. Il componente principale, Hieff UNICON™ Taq DNA Polymerase, è avviato a caldo con metodo anticorpale, che può inibire efficacemente l'amplificazione non specifica causata dal primer annealing durante la preparazione del campione. Allo stesso tempo, la formula aggiunge fattori per migliorare l'efficienza di amplificazione della reazione PCR e facilitatori per equalizzare l'amplificazione dei geni con diversi contenuti di GC (30~70%), in modo che la PCR quantitativa possa ottenere una buona relazione lineare in un'ampia gamma di regioni quantitative. Il prodotto utilizza la reazione di cambio colore misto di diversi coloranti per monitorare l'operazione di pipettaggio, il che riduce efficacemente il verificarsi di errori di pipettaggio.

Caratteristiche

Monitoraggio del pipettaggio: riduzione del rischio di errori di aggiunta/mancati

Amplificazione eccellente: buona linearità su un'ampia gamma lineare

Alta precisione: può distinguere accuratamente i modelli con una differenza di concentrazione doppia

Buona ripetibilità: piccola variabilità tra pozzetti nei pozzetti replicati, con conseguente migliore ripetibilità

Stabile e affidabile: il sistema di reazione può essere conservato a temperatura ambiente per 24 ore e il prodotto rimane inalterato dopo 20 cicli di congelamento-scongelamento

Applicazioni

Analisi della differenza di espressione genica

Analisi quantitativa assoluta

Specifiche

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Questo prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25 e -15 °C per 1 anno.

Cifre

Figura 1. È possibile ottenere risultati affidabili all'interno dell'intervallo dinamico.

Utilizzando 2 µL di template plasmidici con un gradiente di 10^1-10^7, i geni correlati sono stati amplificati. Hieff UNICON™ Il master mix ColorGPS è in grado di rilevare efficacemente un intervallo di quantità di template di 7 ordini di grandezza, ottenendo una buona linearità entro un ampio intervallo lineare.

Figura2Può distinguere con precisione differenze di concentrazione del modello pari a 2 volte.

Utilizzando 2 µL di plasmide diluito in un gradiente 2 volte come stampo, i geni correlati sono stati amplificati. Hieff UNICON™ Il master mix ColorGPS è in grado di risolvere con precisione le differenze di concentrazione del modello.

Figura3Si osserva una piccola variabilità tra pozzetti, che mostra una migliore ripetibilità.

Utilizzando decine di copie di plasmide come stampo, l'amplificazione è stata eseguita con diversi reagenti quantitativi fluorescenti secondo le procedure specificate nei rispettivi manuali di istruzioni. I valori SD indicano che, rispetto ad altri reagenti di trascrizione inversa, il nuovo prodotto presenta differenze minori tra i pozzetti replicati e una migliore ripetibilità.

Figura4. Più flessibile, adatto a procedure standard o rapide.

Nella procedura standard, il tempo di denaturazione e il tempo di estensione sono impostati rispettivamente a 10 secondi e 30 secondi, mentre nella procedura rapida, il tempo di denaturazione e il tempo di estensione sono impostati rispettivamente a 3 secondi e 10 secondi, per rilevare i valori Ct corrispondenti a 10 geni target.I risultati mostrano che i valori Ct ottenuti con il nuovo prodotto sia nelle procedure standard che in quelle rapide presentano una forte correlazione e che il nuovo prodotto può ottenere buoni risultati utilizzando la procedura rapida.

Figura5Dopo che il sistema di reazione è stato preparato, può rimanere stabile a temperatura ambiente per 24 ore.

Utilizzando diversi geni di topo, cellule umane 293 e Arabidopsis thaliana come target, dopo aver preparato il sistema di reazione, è stato posto al buio a diverse temperature per 24 ore prima del rilevamento. Rispetto all'elaborazione immediata, la differenza di rilevamento per diversi geni non supera 0,5 Ct, il che indica che è possibile ottenere risultati stabili anche con operazioni di lunga durata.

Documenti:

Manuali

11190_Manuale_Ver.IT20241218.pdf