Descrizione
CRISPR/Cas9 è una tecnica in cui la nucleasi Cas diretta da RNA apporta specifiche modifiche al DNA nei geni bersaglio, che è un meccanismo di difesa immunitaria acquisito sviluppato da batteri e archeobatteri in risposta agli attacchi di fagi e plasmidi estranei. In questo sistema, la nucleasi Cas9 è guidata con un singolo RNA guida (sgRNA) artificialmente ottimizzato per tagliare il DNA a doppio filamento (dsDNA) nel sito bersaglio, causando rotture del DNA. Il DNA viene riparato con il meccanismo di giunzione delle estremità non omologa o di riparazione diretta dall'omologia in vivo, con conseguente mutazione frameshift, sostituzione o eliminazione di geni.
Il kit di sintesi sgRNA di precisione HifairTM utilizza una miscela di RNA polimerasi T7 per trascrivere in modo efficiente sgRNA spCas9. Il kit contiene una sequenza specifica che viene riconosciuta dalla proteina Cas9 e funge da impalcatura. Una parte della sequenza può essere parzialmente sovrapposta alla sequenza specifica del bersaglio progettata dall'utente. I filamenti complementari vengono riempiti dalla DNA polimerasi per generare modelli dsDNA per la trascrizione. Utilizzando il reagente fornito e le sequenze di DNA specifiche progettate dall'utente, il kit può ottenere 20-100 iog di sgRNA funzionale entro 4 ore in una singola reazione in provetta.
Caratteristiche
Elevata resa di sintesi: In una reazione a provetta singola della durata di 4 ore, la resa di sgRNA può raggiungere 20 - 100 μg.
Ampia gamma di applicazioni: Si possono ottenere rese elevate per diversi tipi di sgRNA.
Elevata purezza: L'sgRNA sintetizzato ha una singola banda.
Alta attività: L'sgRNA sintetizzato può guidare efficacemente Cas9 nella scissione del DNA bersaglio.
Applicazioni
Modifica genetica CRISPR/Cas
Componenti
| Componenti n. | Nome | 11355ES05 | 11355ES25 | 11355ES50 | 11355ES60 |
| 11355-A | Miscela enzimatica 10×sgRNA | 10 microlitri | 50 microlitri | 100 microlitri | 200 microlitri |
| 11355-B | Tampone di reazione sgRNA 10× | 10 microlitri | 50 microlitri | 100 microlitri | 200 microlitri |
| 11355-C | 2×Miscela di enzimi Canace | 62,5 μL | 312.5 microlitri | 625 microlitri | 1,25 ml |
| 11355-D | Modello di impalcatura | 6,25 μL | 31,25 microlitri | 62,5 μL | 125 microlitri |
| 11355-E | NTP (25 mM ciascuno) | 40 microlitri | 200 microlitri | 400 microlitri | 800 microlitri |
| 11355-F | Controllo sgRNA Oligo (10 ioM) | 2 microlitri | 10 microlitri | 20 microlitri | 40 microlitri |
Spedizione e stoccaggio
Questo prodotto deve essere conservato a -25 ~ -15loC per 2 anni.
Cifre
Figura 1.La quantità di sintesi di sgRNA in diversi punti temporali
Figura 2.La resa di sintesi di sgRNA con sequenze diverse
Figura 3.La purezza dell'sgRNA sintetizzato (determinata da Agilent 2100)
Figura 4.Il grafico dell'efficienza di scissione dell'sgRNA
Documenti:
Scheda di sicurezza
11355_Scheda di sicurezza_Versione EN20250120.pdf
Manuali
11355_Manuale_Ver.IT20240710.pdf
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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