Descrizione
La T4 Polynucleotide Kinase (T4 PNK) è una 5'-idrossi chinasi che facilita il trasferimento del γ-fosfato dall'ATP ai termini 5'-idrossilici delle catene oligo- o polinucleotidiche, tra cui DNA o RNA a doppio e singolo filamento, nonché ai nucleotidi 3'-monofosfati. Questo trasferimento è reversibile. La T4 PNK possiede anche attività 3'-fosfatasi, che defosforila i termini oligonucleotidici 3'-fosforilati, i nucleotidi deossi 3'-monofosfati e i nucleotidi deossi 3'-difosfati. In presenza di ADP, la T4 PNK può agire come una 5'-fosfatasi, promuovendo lo scambio di gruppi 5'-fosfato su oligo- o polinucleotidi 5'-fosforilati con ATP. Questo enzima è ampiamente utilizzato per la costruzione di librerie di DNA e per l'etichettatura delle estremità per generare sonde.
Applicazioni
Fosforilazione delle estremità 5' del DNA o dell'RNA per la successiva legatura
Etichettatura terminale del DNA o dell'RNA per fungere da sonde e per scopi di sequenziamento
Fosforilazione 5' di mononucleotidi con un'estremità 3' fosforilata per preparare substrati pNp per l'attacco alle estremità 3' del DNA o dell'RNA
Etichettatura delle estremità 5' degli oligonucleotidi che possiedono un gruppo fosfato 3'
Specifiche
Sfonte | Batteriofago T4 |
Peso molecolare | 36.78 kDa |
Concentrazione | 10 Unità/μL |
Unità DDefinizione | Un'unità è definita come la quantità richiesta per catalizzare l'incorporazione di 1 nmol di [γ-32P] ATP in una reazione entro 30 minuti a 37°C |
Componenti
Componenti NO. | Nome | 12902ES76 | 12902ES86 | 12902ES92 |
12902-A | T4 polinucleotide chinasi(10 U/μL) | 50 microlitri | 250 microlitri | 1 ml |
12902-B | Tampone PNK 10×T4 | 500 microlitri | 1 ml | 2×1 ml |
[Nota]: il tampone PNK 10×T4 non contiene ATP; i clienti devono aggiungerlo da soli, con una concentrazione finale di riferimento di 1 mM, oppure utilizzare il tampone della DNA ligasi T4.
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