Descrizione
Materiale Versatilità La T4 DNA Ligase è una variante della T4 DNA Ligase. Questo enzima è adatto per catalizzare la reazione di legatura tra molecole coesive o con estremità smussate. È un prodotto monoenzimatico progettato per collegare frammenti di DNA e adattatori durante il processo di preparazione della libreria nel sequenziamento di nuova generazione (NGS). Hieff® Versatilità La DNA ligasi T4 è stata ampiamente convalidata tramite sequenziamento ad alto rendimento e mostra una qualità eccezionale.
Caratteristica
- Alta fedeltà
- Termotollerante
Scopri di più sullo sviluppo versatile della DNA ligasi T4
Specifiche
| Fonte | Escherichia coli ricombinante |
| Buffer di archiviazione | 50 mm Tris-HC1,100 mM KC1,0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glicerolo, pH 7,5Avanti0,2 a 25℃ |
| Definizione di unità | In un sistema di reazione di legatura di 20 μL, la quantità di enzima richiesta per catalizzare la legatura di oltre il 50% dei frammenti di DNA, quando 6 μg di λDNA-Hind III vengono fatti reagire a 16°C per 30 minuti, è definita come 1 unità di attività (U). |
Componenti
| Componenti | Nome | 12996ES60 60 KU | 12996ES62 600 KU |
| 12996-A | Prodotti Ligasi del DNA T4 versatile (600 U/µL) | 100 microlitri | 1000 microlitri |
| 12996-B | Tampone di ligasi del DNA 10×T4 | 500 microlitri | 3×1500 μL |
Magazzinaggio
Questo prodotto deve essere conservato a -25~-15℃ per 2 anni.
Figura
Lascia un messaggio per richiedere informazioni sui dati di confronto delle prestazioni tra questo enzima e altre DNA ligasi T4 termostabili e convenzionali di alto livello.
Appunti
1. Si prega di operare con camici da laboratorio e guanti monouso,per la tua sicurezza.
2. Se si verifica una piccola quantità di precipitazione nel tampone, è un fenomeno normale. Si prega di capovolgere e mescolare accuratamente il tampone prima di utilizzarlo.
3. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
Protocollo
1. Gli attuali kit di preparazione delle librerie di DNA mainstream che utilizzano il metodo basato sulla legatura in genere non richiedono fasi di purificazione dopo la riparazione delle estremità e l'A-tailing. I frammenti di DNA vengono sottoposti direttamente alla legatura dell'adattatore senza purificazione. Questo kit è compatibile con il mainstream sistemi di riparazione delle estremità e di giunzione A-tailing disponibili in commercio per la legatura senza soluzione di continuità dell'adattatore.
Preparare la seguente reazione in una provetta da microcentrifuga su ghiaccio, mescolare delicatamente pipettando o agitando, centrifugare brevemente e inattivare a 20°C per 15 minuti.
Tabella 1. Sistema di reazione per la legatura dell'adattatore
| Componente | Volume(microlitro） | Concentrazione finale |
| DNA con coda dA | 60 | 1× |
| Tampone di ligasi del DNA T4 10× | 10 | 0,1 μM-0.5 micron |
| 50% PEG6000 | 12* | 1 da -400 a |
| Adattatore DNA | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| Acqua priva di nucleasi | su a 100 | - |
【Nota】*La soluzione PEG6000 al 50% non è fornita nel kit, dovrai prepararla tu stesso
**Si prega di fare riferimento alla tabella 2 per il quantità di adattatore.
***La quantità di T4 DNA Ligasi può essere aggiunta secondo necessità, da 3 a 5 μL.
2. La concentrazione dell'adattatore influisce direttamente sull'efficienza della legatura e sulla resa della libreria. L'uso eccessivo di adattatori può causare In più dimeri adattatori, mentre un basso utilizzo può influire sull'efficienza della connessione e sulla produzione della libreria. Tabella 2 elenca la quantità di adattatore consigliata per diverse quantità di DNA in input.
Tabella 2. Quantità di adattatore consigliata per 100 pg-1 μg di DNA di input
| Inserisci DNA | Concentrazione |
| 0,1 non | |
| 1 ng | 0,5μM |
| 10 ng | 1 micron |
| 25 ng | 2 micron |
| 100 ng~1000 ng | 10 micron |
【Nota】：La quantità di adattatore può essere regolato in base ai requisiti indicati nella tabella sopra.
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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