Descrizione
Esonucleasi I, derivata da un gene modificato Escherichia coli ceppo che esprime il gene Exo I, esibisce attività esonucleasica che digerisce il DNA a singolo filamento dall'estremità 3' a 5'. Rilascia sequenzialmente deossiribonucleotidi 5'-monofosfati, preservando l'integrità dei dinucleotidi 5'-terminali. Questo enzima è utilizzato prevalentemente per la scomposizione e la rimozione dei primer in seguito all'amplificazione PCR. Rimane inattivo verso il DNA a doppio filamento e i filamenti di DNA con estremità idrossiliche 3' che sono bloccati dalla fosforilazione o acetilazione.
Caratteristiche
Nessuna esonucleasi residua (a doppio filamento), endonucleasi o RNasi
Inattivato semplicemente trattandolo a 80°C per 15 minuti
Applicazioni
Rimuovere i primer a singolo filamento dal sistema di reazione PCR prima del sequenziamento del DNA Sanger o dell'analisi SNP
Rimuovere i primer a singolo filamento dal sistema di reazione PCR annidato
Eliminare il DNA lineare a singolo filamento dal campione, lasciando il DNA a doppio filamento
Specifiche
| Sfonte | Escherichia coli |
| Peso molecolare | 55 morteUN |
| Concentrazione | 20 Unità/μL |
| Unità DDefinizione | Un'unità è definita come la quantità di enzima necessaria per catalizzare il rilascio di 10 nmol di nucleotidi solubili in acido dal DNA a singolo filamento [3H] a una concentrazione di 0,17 mg/ml in un 50 μL sistema di reazione contenente tampone di reazione Exonuclease I 1X a 37°C entro 30 minuti |
Componenti
| Componenti NO. | Nome | 14535È80 | 14535È90 |
| 14535-A | Esonucleasi IO (2(0 unità/μL) | 250 microlitri | |
| 14535-B | 10×Esonucleasi I Tampone di reazione | 1 ml | 1 ml |
Spedizione e stoccaggio
Questo prodotto deve essere conservato a -25 ~ -15℃ per 2 anni.
Cifre
Figura 1. Capacità di digestione dell'esonucleasi I sul DNA a singolo filamento
Nota: in un sistema di reazione da 20 μL, è stata aggiunta una concentrazione finale di substrato di DNA a singolo filamento pari a 15 pmol/μL. Sono state utilizzate diverse quantità (0,63, 1,25, 2,5, 5, 10, 20 U) di Yeasen e Exonuclease I del Fornitore A, incubate a 37 °C per 15 minuti, seguite da inattivazione termica a 80 °C per 15 minuti. È stata impiegata l'elettroforesi su gel di poliacrilammide per rilevare la degradazione del DNA a singolo filamento. I risultati hanno dimostrato che Yeasen's Exonuclease I ha la stessa capacità di digerire il DNA a singolo filamento del Fornitore A.
Documenti:
Scheda di sicurezza
14535_Scheda di sicurezza_Versione EN20241210.pdf
Manuali
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Indagine
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