Descrizione
L'Uracil-Specific Excision Reagent (indicato come USER) è un cocktail enzimatico costituito da Uracil DNA Glycosylase (UDG) ed Endonuclease VIII (Endo VIII). È in grado di generare gap a singolo nucleotide specificamente nelle posizioni dell'uracile. L'UDG facilita la scissione della base dell'uracile, con conseguente formazione di un sito AP (sito apurinico/apirimidinico) mantenendo al contempo l'integrità dello scheletro fosfodiesterico zucchero-fosfato. L'attività endonucleasica di Endo VIII scinde il fosfodiesterico bonds sia al 3′ e 5′ estremità del sito apurinico, liberando così lo zucchero desossiribosio privo di base.
Caratteristiche
Nessuna nucleasi o RNasi residua
Elevata efficienza di escissione
Applicazioni
Costruzione di librerie specifiche per filamenti di RNA
Clonazione mediata da escissione specifica dell'uracile (USER-LIC)
Assemblaggio del DNA, come l'assemblaggio dei monomeri TALE
Costruzione seriale di più librerie di cDNA da singole cellule
Specifiche
| Concentrazione | 1 unità/µl |
| Unità DDefinizione | Uno L'unità è definita come la quantità di enzima necessaria per intaccare un oligonucleotide a doppio filamento di 34 mer contenente una singola base uracile in una molecola di 10 μL sistema di reazione a 37°C per 15 minuti, che corrisponde alla scissione di 10 pmol del substrato. |
| IOnattivazione Ccondizioni | 75℃, 10 minimo |
Componenti
| Componente n. | Nome | 14537ES50 | 14537ES72 |
| 14537-A | Reagente di escissione specifico per l'uracile (1 U/μL) | 50 microlitri | 250 microlitri |
| 14537-B | 10×Reagente di escissione specifico per uracile Tampone di reazione | 1.25 ml | 1.25 ml |
Spedizione e stoccaggio
I prodotti devono essere conservati a -25℃ ~ -15℃ per 1 anno.
Cifre
Figura 1. Confronto degli effetti dell'escissione
Nota: 10 pmol di DNA a doppio filamento contenente dUTP sono stati escissi utilizzando l'enzima USER di Yeasen e un prodotto comparabile del Fornitore A. I risultati dell'elettroforesi su gel di agarosio hanno mostrato che gli effetti dell'escissione dell'enzima USER di Yeasen erano coerenti con quelli del Fornitore A
Figura2Confronto dei conteggi delle colonie per la clonazione USER-LIC
Nota: un frammento di DNA di 600 bp è stato legato utilizzando l'enzima USER di Yeasen e un prodotto comparabile del Fornitore A per costruire un vettore, che è stato poi trasformato in Escherichia coli e coltivate. È stato osservato il numero di colonie sulla piastra di coltura e i risultati hanno indicato che l'efficienza di clonazione USER-LIC utilizzando l'enzima USER di Yeasen era superiore a quella del Fornitore A.
Documenti:
Scheda di sicurezza
14537_Scheda di sicurezza_Versione EN20241210.pdf
Manuali
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Indagine
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