La RNasi HII è un enzima interno alla ribonucleasi ottenuto dall' Pirococco abyssi ed espresso in modo ricombinante in Escherichia coli. Riconosce il doppio filamento DNA-rN-DNA/DNA, tagliando nel sito in cui i ribonucleotidi sono incorporati nel DNA. Tuttavia, la sua attività sull'RNA a singolo filamento è molto bassa e non mostra alcuna attività di taglio su dsDNA o ssDNA. RNasi HII taglia nel sito di un singolo residuo di ribonucleotide dall'estremità 5', producendo un gruppo fosfato 5' e un'estremità idrossilica 3' dopo il taglio. Questo enzima RNasi HII ha un'attività ottimale a 70~75°C, è attivo tra 50°C e 75°C, ma ha un'attività molto bassa a temperatura ambiente. Il prodotto è altamente termostabile, con quasi nessuna perdita di attività dopo l'incubazione a 95°C per 45 minuti ed è compatibile con vari sistemi di reazione PCR.

Specifiche

Componenti

Magazzinaggio

Questo prodotto deve essere conservato a -25~-15℃ per 2 anni.

Applicazione del prodotto

1. Rilevazione mediante LAMP con sonde ad alta sensibilità.
2. PCR dipendente da RNasi HII (rhPCR).
3. Rimozione dei ribonucleotidi non corrispondenti formati durante la reazione a catena della polimerasi.
4. Degradazione della porzione di RNA dei frammenti di Okazaki.

Appunti

1. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
2. Per la vostra sicurezza, operate indossando camici da laboratorio e guanti monouso.

Cifre

1. Escherichia coli residuo di DNA genomico < 0,5 copie/100 U

Rilevamento di Escherichia coli Il residuo di DNA genomico in diversi lotti di RNasi HII ha mostrato che il residuo di DNA genomico dell'ospite di RNasi HII di YEASEN è ben al di sotto di 0,5 copie/100 U.

Fig 4. Rilevamento di Escherichia coli residuo di DNA genomico

2. Test di resistenza al calore a 95°C

Dopo aver riscaldato RNase HII a 95°C per 0-45 minuti, è stata testata l'attività enzimatica di RNase HII. I risultati hanno indicato che non vi era quasi nessuna perdita di attività enzimatica in RNase HII di YEASEN anche dopo 45 minuti di riscaldamento.

Fig 5. Prova di resistenza al calore a 95°C

3. Nessuna esonucleasi, enzima di nicking o residuo di RNasi (dose da 1 U)

Incubando 1 U di diversi lotti di RNasi HII con i rispettivi substrati DNA/RNA a 37°C per 4 ore, i risultati dell'elettroforesi su gel di agarosio hanno indicato che non erano presenti esonucleasi, enzimi di nicking o residui di RNasi in RNasi HII.

Fig 6. Rilevamento dell'esonucleasi, dell'enzima di nicking e del residuo RNasi

Documenti:

Manuali