Descrizione
Ribonucleasi R (RNasi R) da Escherichia coli, è una esonucleasi 3′→5′ dipendente dal magnesio che Potere digerisce tutti gli RNA lineari ma non digerisce le strutture lariat o circolari di RNA. La maggior parte degli RNA cellulari verrà digerita completamente da RNase R, ad eccezione di tRNA, RNA 5S e lariat intronici. RNase R è utilizzata per l'arricchimento di circRNA in campioni biologici, l'identificazione di sequenze lariat introniche, l'identificazione di circRNA esonici, lo studio dello splicing alternativo.
Caratteristiche
Efficacia e qualità garantite con certificazione ISO 13485.
Disponibili in grandi quantità o in configurazioni personalizzate.
Scompone efficacemente l'RNA lineare, preservando i loop e gli RNA circolari.
La digestione selettiva degli RNA lineari migliora l'isolamento degli RNA circolari per la produzione di proteine o la costruzione di librerie di cDNA intronici.
Offrendo RNAse R di grado GMP (14615)
Specifiche
| Fonte | Un ricombinante Escherichia coli ceppo che trasporta il gene RNAse R da Escherichia coli |
| Temperatura ottimale | 37℃ |
| Buffer di archiviazione | 50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 0,1% Triton® X-100, 1 mM di DTT, 50% glicerolo, pH 7,5 a 25℃ |
| Definizione di unità | Un'unità converte 1 μg di poli-r(A) in nucleotidi solubili in acido in 10 minuti a 37°C in 20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM KCl e 0,1 mM MgCl2. |
Applicazione
RNasi R funge da componente fondamentale nella sintesi di RNA circolare (circRNA). CircRNA promette di migliorare la stabilità farmaceutica e la biostabilità. Con le loro strutture covalentemente chiuse, i circRNA resistono alle esonucleasi di RNA. [1,2] RNasi R trova ampia applicazione in vari studi, tra cui lo splicing alternativo, la produzione di cDNA di introni e l'isolamento di intermedi di splicing e lariat.
Componenti
| Componenti n. | Nome | 14606ES72 | 14606ES86 | 14606ES92 |
| 14606-A | RNasi R (20 U/μL) | 12,5 μL | 125 microlitri | 500 microlitri |
| 14606-B | Tampone di reazione RNasi R 10× | 250 microlitri | 3 × 1 ml | 10 ml. |
Magazzinaggio
Questo prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25 e -15 °C per 2 anni.
Istruzioni
Preparare il seguente sistema di reazione in una provetta da microcentrifuga sterile
| componente | Volume |
| Tampone di reazione RNasi R 10× | 2 microlitro |
| campione di RNA | 1 microgrammi |
| RNasi R (20 U/μL) | 2-4 anni |
| ddH senza RNasi2Lo | Fino a 20 microlitro |
Incubare a 37 ℃ per 10 - 30 minuti.
Cifre
Figura 1: Le molecole di RNA lineare possono essere digerite da Yeasen RNAse R.
Figura 2: Il CircRNA non può essere digerito dalla Yeasen RNAse R.
Appunti
- L'attività della RNasi R richiede 0,1-1,0 mM di Mg2+;
- Con l'aumento dell'RNA, il tempo di reazione può essere esteso e la quantità di enzima può essere aumentata in modo appropriato;
- Il contenuto di EDTA nei campioni di RNA può influenzare l'attività della RNasi R.
- Incubare a 70 ℃ per 10 minuti può inattivare l'enzima.
Riferimento
- Qu L, Yi Z, Shen Y et al. Vaccini circolari a RNA contro SARS-CoV-2 e varianti emergenti. Cellula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- Chen L, Wang C, Sun H, et al. La cassetta degli attrezzi bioinformatica per la scoperta e l'analisi del circRNA. Breve bioinformazione. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
Manuali
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