Descrizione
Hifair™ Super Reverse Transcriptase è una trascrittasi inversa di nuova generazione, Quale era eNprogettato da M-MLV. Questo enzima è privo di attività RNasi H e mostra una stabilità termica notevolmente migliorata, tollerando temperature di reazione fino a 70°C. È altamente adatto per la trascrizione inversa efficiente di modelli di RNA con strutture secondarie complesse.
Applicazioni
Questo prodotto è adatto per esperimenti di sintesi RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq e cDNA. La temperatura di reazione di trascrizione inversa può raggiungere fino a 70°C.
Definizione di unità
Un'unità (U) di attività enzimatica è definita come la quantità di enzima necessaria per incorporare 1 nmol di dTTP in un materiale insolubile in acido entro 10 minuti a 37°C, utilizzando Poly(A).Oligo(dT) come primer-stampo.
Componente
| Componente | Nome | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Alta qualità™ Super trascrittasi inversa (200 U/μL) | 50 microlitri | 250 microlitri |
Condizioni di conservazione
Conservare a una temperatura compresa tra -25˚C e -15˚C per un massimo di 18 mesi.
Istruzioni per l'uso
Procedura di sintesi del cDNA del primo filamento
1. Denaturazione dell'RNA (passaggio facoltativo)
1. La denaturazione dell'RNA aiuta ad aprire le strutture secondarie, migliorando significativamente la resa del cDNA del primo filamento.
| Componente | Volume |
| ddH2O senza RNasi | a 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) o Primer casuali (50 μM) o Primer specifici per gene (2 μM) | 1 μL |
| Modello RNA | RNA totale: 10 pg - 5 μg o mRNA: 10 pg - 500 ng |
· Riscaldare a 65°C per 5 minuti, quindi raffreddare rapidamente nel ghiaccio per 2 minuti.
· Centrifugare brevemente per raccogliere il liquido di reazione e aggiungere la miscela di reazione di trascrizione inversa come mostrato di seguito.
2. Configurazione della reazione di trascrizione inversa (sistema da 20 μL)
| Componente | Volume |
| Miscela di reazione del passaggio precedente | 13 microlitri |
| Tampone di reazione 5× | 4 microlitri |
| Miscela dNTP (10 mM) | 1 μL |
| Trascrittasi super inversa Hifair® (200 U/μL) | 1 μL |
| Inibitore RNasi (40 U/μL) | 1 μL |
3. Impostazioni del programma di trascrizione inversa
| Temperatura | Tempo |
| Temperatura 25°C* | 5 minuti |
| Temperatura: 50-70°C | 15-30 minuti |
| 85°C** | 5 minuti |
*Quando si utilizzano i Random Primers, incubare a 25°C per 5 minuti. Se si utilizzano Oligo(dT)18 o Gene-Specific Primers, questo passaggio può essere omesso.
Il riscaldamento a 85°C per 5 minuti inattiva la trascrittasi inversa e può essere regolato secondo necessità.
Il prodotto della trascrizione inversa può essere utilizzato immediatamente per successive reazioni PCR o qPCR, conservato per breve tempo a -20°C o per una conservazione a lungo termine a -80°C dopo la suddivisione in aliquote per evitare cicli di congelamento-scongelamento.
Precauzioni
1. Mantenere un ambiente di laboratorio pulito; indossare guanti e maschere pulite. Assicurarsi che tutti i materiali di consumo sperimentali siano privi di RNasi per prevenire la contaminazione.
2. Eseguire tutte le operazioni sul ghiaccio per evitare la degradazione dell'RNA.
3. Utilizzare campioni di RNA di alta qualità per garantire una trascrizione inversa efficiente.
4. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
5. Per la vostra sicurezza e salute, indossate un camice da laboratorio e guanti monouso quando maneggiate il prodotto.
Documenti:
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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