Descrizione
La T4 RNA Ligase 1, nota anche come T4 RNA ligase, è un enzima dipendente da ATP che catalizza la formazione di un legame fosfodiesterico tra il terminale 5'-P e il terminale 3'-OH di RNA a singolo filamento (ssRNA), DNA a singolo filamento (ssDNA) o molecole mononucleotidiche. La T4 RNA Ligase 1 può eseguire la legatura tra molecole di ssRNA (in modo più efficiente), tra ssDNA e ssRNA (con efficienza inferiore) e può anche essere utilizzata per la legatura tra molecole di ssDNA (con efficienza molto bassa). È adatta per la legatura di molecole di ssRNA e per l'attacco di adattatori 5' nella costruzione di librerie miRNA per NGS.
Figura 1. Meccanismo d'azione della T4 RNA Ligasi 1
Caratteristiche
Catalizza la formazione di un legame fosfodiesterico tra il terminale 5'-P e il terminale 3'-OH di molecole di RNA a singolo filamento (ssRNA), DNA a singolo filamento (ssDNA) o mononucleotidi.
Applicazioni
Clonazione dell'RNA
Adattatori 5' nella costruzione di librerie miRNA per NGS
Preparazione dell'RNA circolare
Specifiche
| Definizione di unità | Un'unità è definita come la quantità di enzima necessaria per convertire 1 nanomole di 5-[32P] rA16 in una forma resistente alla fosfatasi in 30 minuti a 37loC |
| Fonte | Proteina ricombinante espressa da Escherichia coli deriva dal batteriofago T4 |
| Condizioni di reazione | 10×Tampone di reazione T4 RL1: 500 mM Tris-HCl (pH 7,5 a 25loC), 100 mM MgCl2, 20 mM DTT; Incubazione ottimale a 37loC |
| Condizioni di inattivazione | Riscaldamento a 65loC per 15 minuti o l'ebollizione per 2 minuti può inattivare la T4 RNA Ligasi 1. In alternativa, l'aggiunta di una concentrazione finale di 50 mM EDTA pH 8,0 può terminare la reazione della T4 RNA Ligasi 1 |
Componenti
| Componenti NO. | Nome | 14651ES80 | 14651ES90 |
| 14651-A | T4 RNA ligasi 1 (1(0 unità/μL) | 500 microlitri | |
| 14651-B | 10×Tampone di reazione T4 RL1 | 200 microlitri | 1 ml |
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