La nucleasi AapCas12b (nota anche come C2c1) è un'endonucleasi del DNA mediata da tracrRNA:crRNA (o sgRNA), derivata dal batterio termofilo Aliciclobacillus acidophilus. In presenza di una sequenza PAM (TTN) nel DNA a doppio filamento (dsDNA) bersaglio, scinde specificamente il dsDNA bersaglio, causando rotture del doppio filamento e generando estremità appiccicose. AapCas12b può scindere specificamente i bersagli del DNA a singolo filamento indipendentemente dalla sequenza PAM. Sia i bersagli del DNA a doppio filamento che quelli a singolo filamento possono attivare l'attività di trans-scissione di AapCas12b. Quando l'enzima AapCas12b forma un complesso ternario con sgRNA e DNA bersaglio, viene attivato per l'attività di trans-scissione non specifica dell'ssDNA, tagliando qualsiasi sequenza arbitraria di ssDNA nel sistema. La temperatura di reazione di scissione ottimale per AapCas12b è 60^loC, che lo rende più resistente al calore rispetto ad AacCas12b e più adatto all'uso con LAMP per sviluppare sistemi di amplificazione isotermica/rilevamento CRISPR-Cas.

Caratteristiche

Ampio intervallo di temperatura di reazione: Presenta attività di scissione nell'intervallo di temperatura di 37~65^loC

Basso residuo di nucleasi: Nessuna esonucleasi residua, nickasi o RNasi

Attività di scissione cis: Scissione altamente efficace del DNA a doppio filamento in vitro

Attività di trans-scissione: Elevata attività di trans-scissione, adatta per il rilevamento degli acidi nucleici

Applicazioni

Modifica genetica CRISPR/Cas

Diagnostica e rilevamento basati sul sistema CRISPR/Cas

Altre applicazioni di rilevamento combinate con tecnologie di amplificazione isotermica degli acidi nucleici (RPA e LAMP), ecc.

Specifiche

Componenti

Naveping e archiviazione

Questo prodotto deve essere conservato a -25 ~ -15^loC per 2 anni.

Cifre

Figura 1. Verifica dell'attività di scissione cis della nucleasi AapCas12b

Nota: In un 20 ioSistema di reazione L contenente Target dsDNA con una sequenza PAM, sgRNA, Cas12b e 1×tampone di reazione, la miscela è stata incubata a 60^loC per 30 minuti e poi inattivato a 85^loC per 5 minuti. I risultati dell'elettroforesi su gel di agarosio hanno mostrato che tre lotti di AapCas12b Nuclease erano tutti in grado di scindere efficacemente il dsDNA, con un'efficienza di scissione paragonabile a quella del marchio importato T*.

Figura 2. Risultati del test di attività di trans-scissione della nucleasi AapCas12b

Nota: In un 20 ioSistema di reazione L contenente Target dsDNA con una sequenza PAM, sgRNA, Cas12b, sonda fluorescente Report ssDNA e 1×tampone di reazione, la miscela è stata incubata a 60^loC per 1 ora e il segnale di fluorescenza è stato raccolto ogni 30 secondi. I risultati hanno mostrato che in presenza di Target DNA, sgRNA e Cas12b insieme, la sonda fluorescente Report ssDNA poteva essere scissa, rilasciando così il segnale di fluorescenza.

Documenti:

Scheda di sicurezza

14808_Scheda di sicurezza_Versione EN20241209.pdf

Manuali

14808_Manuale_Ver.IT20241209.pdf