Descrizione
La DNA ligasi PBCV, nota anche come SplintR ligasi, DNA ligasi PBCV-1 o DNA ligasi del virus della clorella, è una DNA ligasi ATP-dipendente che catalizza in modo efficiente la reazione di legatura di due filamenti di DNA adiacenti complementari a un singolo filamento di RNA. In questi due filamenti di DNA adiacenti, quello che fornisce il gruppo idrossilico 3' è chiamato filamento di DNA accettore, mentre quello che fornisce il gruppo fosfato 5' è chiamato filamento di DNA donatore. Durante questo processo di legatura, un filamento di RNA complementare agisce come "stecca" o "impalcatura" per i due filamenti di DNA. L'attività della DNA ligasi PBCV è molto più elevata di quella della DNA ligasi T4 tradizionale e mostra una forte affinità per i substrati di DNA con RNA come stecca (Km apparente = 1 nM, dove un valore Km più piccolo indica un'affinità più forte). È in grado di rilevare specie di RNA uniche a livello subnanomolare in miscele complesse, il che lo rende adatto ai processi di arricchimento del target in applicazioni quali il rilevamento di RNA ad alta sensibilità, il sequenziamento di nuova generazione e la diagnostica molecolare.
Caratteristiche
Nessuna nucleasi, endonucleasi, RNasi o fosfatasi residua
Applicazioni
Rilevamento di microRNA e altri piccoli RNA basato sul metodo della sonda
Collegamento del DNA a singolo filamento tramite fissazione "a morsetto" da parte di sequenze di RNA complementari
Utilizzo di sonde di DNA per ottenere il rilevamento di RNA specifici
Rilevamento di SNP o splicing alternativo
Analisi RASL-seq
Specifiche
| Fonte | Il gene della DNA Ligasi del PBCV-1 proveniente dal virus della Chlorella espresso in Escherichia coli |
| Peso molecolare | 34 mila dollari |
| Concentrazione | 25 unità/µl |
| Unità Definizione | Un'unità è definita come la quantità di enzima richiesta per raggiungere almeno il 50% di completamento della legatura di 2 pmol di substrato ibrido DNA:RNA marcato con FAM entro 15 minuti a 25℃ nel 1×Tampone PBCV Ligasi |
| Inattivazione Ccondizioni | 65℃, 20 minimo |
Componenti
| Componente n. | Nome | 14962ES80 | 14962ES90 |
| 14962-A | Ligasi del DNA del PBCV (25 U/µL) | 50 µl | 200 µl |
| 14962-B | 10 x tampone PBCV Ligasi | 1 ml | 1 ml |
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