Descrizione
HifairTM Pronto per Lyo IO Kit RT-qPCR Multiplex One Step((UDG più) è un kit di PCR quantitativa multiplex basato sull'RNA come stampo. Nel corso dell'esperimento, la trascrizione inversa e la PCR quantitativa sono state eseguite nella stessa provetta, il che ha semplificato l'operazione sperimentale e ridotto il rischio di contaminazione.IL il design esclusivo del tampone e dell'enzima garantisce che possa essere utilizzato nella preparazione e nella progettazione del prodotto di sistemi di reazione liofilizzati RT-qPCR in un unico passaggio.
In questo kit, il primo filamento di cDNA è stato sintetizzato in modo efficiente da Hifair resistente al caloreTM Trascrittasi inversa e amplificata quantitativamente da UniconTM HotStart Taq DNA Polimerasi. Il kit contiene principalmente ottimizzato ltampone yophilizable, miscela di enzimi, ecc. Inoltre, vengono aggiunti i fattori che possono inibire efficacemente l'amplificazione PCR non specifica e migliorare l'efficienza di amplificazione di più reazioni qPCR, il che può garantire l'efficienza di amplificazione e portare a termine fino a più reazioni di amplificazione.
Questo kit è dotato di lioprotettivo che può essere utilizzato per la liofilizzazione.
Specifiche
| Componenti n. | 16645È60 / 16645È80 / 16645ES92 |
| Misurare | 100 T / 1000 T / 10000 tonnellate |
Componenti
| Nome | 16645ES60 (100 tonnellate) | 16645ES80 (1.000 tonnellate) | 16645ES92 (10.000 tonnellate) | |
| 16645-UN | 4×Alta qualitàTM Lyo-Buffer | 600 μL | 6 ml. | 60 ml. |
| 16645-B | HifairTM Miscela di liofilizzatori | 100 μL | 1 ml. | 10 ml |
| 16645-C | Lioprotettore | 800 microlitri | 8 ml. | 80 ml |
Magazzinaggio
IL prodotto dovrebbe essere conservato a -25℃ ~ -15℃ per 1 anno. Dovrebbe evitare ripetuti congelamenti e scongelamenti.
Istruzioni
1. Composizione della reazione:
| Componenti | Volume ((milioni di litri) | Concentrazione finale |
| 4×Alta qualitàTM Lyo-Buffer | 6 | 1× |
| HifairTM Miscela di liofilizzatori | 1 | - |
| Lioprotettore | 8 | - |
| Miscela di primer (10 μM) | 1 | |
| Miscela di sonda (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 μM |
| Modello RNA | 5 | - |
| DEPC H2Lo | a 25 | - |
Nota：Assicurarsi di mescolare bene prima dell'uso, evitando la formazione di bolle eccessive causate da vibrazioni violente.
2. Protocollo di ciclismo ottimizzato
(1) Procedura di amplificazione standard
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°CUN | 1 | |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 5 minimo | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C |
| 45 cicli |
| 60°CB | 30 secondoC |
(2) Programma di amplificazione rapida
|
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°CUN | 2 minimo | 1 |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 2 secondo | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C |
| 45 cicli |
| 60°CB | 13 secondoC |
Nota:
a) Trascrizione inversa: la temperatura può essere selezionata tra 42°C o 50°C per 10-15 minuti.
b) Reazione di amplificazione: la temperatura viene regolata in base al valore Tm dei primer progettati.
c) Acquisizione del segnale di fluorescenza: impostare la procedura sperimentale in base ai requisiti del manuale dello strumento.
3. Applicazione attrezzatura
Attrezzatura con Rox：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Veloce, StepOne™, StepOne Plus™
Attrezzatura con Low Rox：ABI 7500, 7500 Veloce, ViiA™7, QuantStudio™ 3 e 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Prodotti Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
Attrezzatura senza Rox：
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000
Scienza applicata Roche Ciclo di lavaggio LightCycler® 480, Ciclo di lavaggio LightCycler® 2.0, Ciclo di lavaggio LightCycler® 96
Termo Ciclore scientifico PikoReal; Cefeide Dispositivo SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
Si prega di utilizzare materiali di consumo privi di RNasi per l'esperimento.
Questo prodotto è per ricerca utilizzare solo!
Procedura di liofilizzazione
Questo kit può essere utilizzato direttamente per la liofilizzazione oppure, su questa base, è possibile esplorare ulteriormente gli eccipienti per diversi primer.La procedura standard di liofilizzazione di questo reagente è la seguente:
| Processo | temperatura | impostare il tempo | durata | Vuoto mbar |
| preliofilizzazione | -45℃ | 10 minuti | 60 minuti | —— |
| Fase iniziale di liofilizzazione | -45 ℃ | 10 minuti | 60 minuti | 0,01 mbar |
| -40 ℃ | 10 minuti | 900 minuti | 0,01 mbar | |
| -35 ℃ | 10 minuti | 60 minuti | 0,01 mbar | |
| -30 ℃ | 20 minuti | 60 minuti | 0,01 mbar | |
| -20 ℃ | 20 minuti | 60 minuti | 0,01 mbar | |
| 0 ℃ | 20 minuti | 60 minuti | 0.01mbar | |
| prova di accumulo di pressione | ||||
| Fase di essiccazione analitica | 5 ℃ | 10 minuti | 20 minuti | 0,01 mbar |
| 10 ℃ | 10 minuti | 20 minuti | 0,01 mbar | |
| 15 ℃ | 10 minuti | 20 minuti | 0,01 mbar | |
| 20 ℃ | 10 minuti | 20 minuti | 0,01 mbar | |
| 25 ℃ | 10 minuti | 240 minuti | 0,01 mbar | |
| prova di accumulo di pressione | ||||
Pagamento e sicurezza
Le informazioni di pagamento vengono elaborate in modo sicuro. Non archiviamo i dettagli della carta di credito né abbiamo accesso alle informazioni sulla tua carta di credito.
Indagine
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