Descrizione
Alta qualità™ Superior Universal Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) è un kit di PCR quantitativa multiplex basato su RNA come stampo. Nel corso dell'esperimento, la trascrizione inversa e la PCR quantitativa sono state eseguite nella stessa provetta, il che ha semplificato l'operazione sperimentale e ridotto il rischio di contaminazione.
In questo kit, il primo filamento di cDNA è stato sintetizzato in modo efficiente da Hifair™ resistente al calore Trascrittasi inversa e amplificata quantitativamente da UNICON™ HotStart Taq DNA Polymerase. Il kit contiene principalmente tampone MP ottimizzato, mix di enzimi. La soluzione tampone contiene già Mg2+ e dNTP Mix. Inoltre, vengono aggiunti i fattori che possono inibire efficacemente l'amplificazione PCR non specifica e migliorare l'efficienza di amplificazione di più reazioni qPCR, il che può garantire l'efficienza di amplificazione e portare a termine fino a più reazioni di amplificazione. Il sistema dUTP/UDG è stato aggiunto per prevenire efficacemente il rischio di contaminazione da aerosol.
Caratteristica
Caratteristiche
1. GOttima versatilità: È adatto per l'amplificazione qPCR e il rilevamento di acidi nucleici di microrganismi patogeni, genomi umani, piante e altre specie.
2. Alta sensibilità: Il sistema tampone attentamente ottimizzato migliora la sensibilità di rilevamento dei modelli a bassa concentrazione fino a 250 copie/mL.
3. sistema dUP/UDG: Il sistema anti-inquinamento dUTP/UDG termolabile è stato introdotto per degradare efficacemente l'inquinamento da aerosol dei prodotti, ridurre i falsi positivi e garantire risultati autentici.
4. Supportoing programma veloce: compatibile con programma veloce da 40 minuti.
5. Super stabilità: stabilee a 37℃ per 14 giorni, ripetendo il congelamento e lo scongelamento 10 volte.
Specifiche
| Componenti n. | 16901È60 / 16901È80 / 16901ES92 |
| Misurare | 100 T / 1000 T / 10000 tonnellate |
Componenti
| Nome | 16901ES60 (100 tonnellate) | 16901ES80 (1.000 tonnellate) | 16901ES92 (10.000 tonnellate) | |
| 16901-UN | 500 microlitri | 5 ml | 50 ml | |
| 16901-B | Alta qualità™ Miscela enzimatica | 100 microlitri | 1 ml | 10 ml |
Nota: 1) 5×Hifair™ MP Buffer è l'abbreviazione di Hifair™ Tampone di sonda RT-qPCR Superior Multiplex One Step, che include dNTP, dUTP, Mg2+, stabilizzatori e altro ancora.
2) Hifair™ Miscela enzimatica contiene principalmente Alta qualità™ trascrittasi inversa, UNICON™ HotStart Taq DNA polimerasi, inibitore della RNasi, E UDGase e così via.
Magazzinaggio
Il prodotto deve essere conservato a -25℃ ~ -15℃ per 1 anno. Si dovrebbe evitare il congelamento e lo scongelamento ripetuti.
Istruzioni
| Volume ((milioni di litri) | Concentrazione finale | |
| 5×Hifair™ Tampone MP | 5 | 1× |
| Alta qualità™ Miscela enzimatica | 1 | - |
| Miscela di primer (10 μM) | 0,4 ciascuno | 0,16 μM |
| Miscela di sonda (10 μM) | 0,2 ciascuno | 0.08μM |
| 1-5 | - | |
| RNasi H libera2Lo | a 25 | - |
1. Composizione della reazione:
Nota：Assicurarsi di mescolare bene prima dell'uso, evitando la formazione di bolle eccessive causate da vibrazioni violente.
UN) Concentrazione del primer: Primer miscela comprendente primer multiplex, a seconda della situazione, la concentrazione ottimale del primer può essere compresa tra 0,1 e 1,0 μM.
B) Concentrazione della sonda: miscela di sonde che include la differenza di marcatura della sonda multiplex del gruppo fluorescente, a seconda della situazione la concentrazione ottimale della sonda può essere compresa tra 0,05 e 0.5 unità di misura.
C) Diluizione del template: la qPCR è altamente sensibile e si raccomanda di diluire il template. Il valore Ct di controllo è adatto tra 20 e 35.
D) Preparazione del sistema: testata con elemento filtrante. Evitare contaminazione incrociata e contaminazione da aerosol.
2. Protocollo di ciclismo ottimizzato
(1) Procedura di amplificazione standard
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo | |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°CUN | 1 | |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 5 minimo | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C | 15 secondo | 45 cicli |
| 60°CB | 30 secondoC |
Nota：
a) Trascrizione inversa: la temperatura può selezionare 50°C o 55°C per 10-15 minuti.
b) Reazione di amplificazione: la temperatura viene regolata in base al valore Tm dei primer progettati.
c) Acquisizione del segnale di fluorescenza: impostare la procedura sperimentale in base ai requisiti del strumento manuale.
(2) Programma di amplificazione rapida
|
| Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo |
| 1 | Trascrizione inversa | 50°C | 5 minimo | 1 |
| 2 | Denaturazione iniziale | 95°C | 30 secondo | 1 |
| 3 | Reazione di amplificazione | 95°C | 5 secondo | 45 cicli |
| 60°C | 20 secondo |
Nota：Se il rilevatore qPCR effettivo supporta l'amplificazione rapida, eseguire un test preliminare per conferma.
3. Attrezzatura per l'applicazione
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Veloce, StepOne™, StepOne Plus™,ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 e 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagemmi Modelli MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Scienza applicata LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Termo Ciclore scientifico PikoReal; Cefeide Ciclo intelligente®; Illumina qPCR ecologico; SLAN 96S, 96P.
Appunti
Si prega di indossare i DPI necessari, come camice e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!
Si prega di utilizzare materiali di consumo privi di RNasi per l'esperimento.
Questo prodotto è per ricerca utilizzare solo!
Pagamento e sicurezza
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Indagine
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