IL Magnetico Residuo Il DNA Campione Kit di preparazione È adatto per IL pretrattamento Di residuo Il DNA In vario biologico campioni. Può massimizzare la separazione e la purificazione di tracce di DNA residuo della cellula ospite nei campioni utilizzando perline magnetiche uniche e un'attenta sistema di buffer ottimizzato.

Il magnetico Kit di preparazione del campione di DNA residuo può essere utilizzato con una varietà di DNA residuo di cellule ospiti kit di rilevamento, incluso il kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti CHO (Cat#41301ES), Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti HEK293 (Cat#41302ES), Kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti Vero (Cat#41303ES), e kit di rilevamento dei residui di DNA delle cellule ospiti di E. coli (Cat#41304ES).

Componenti del prodotto

Spedizione e stoccaggio

1. La parte I viene spedita con un impacco di ghiaccio, 4°C per 1 anno o -20°C per la conservazione a lungo termine.

2. La Parte II viene spedita a temperatura ambiente e conservata per 1 anno a temperatura ambiente.

3. La parte III viene spedita su ghiaccio secco e conservata a -20°C per 1 anno.

4. Dopo aver ricevuto la merce, controllare che i tre componenti della Parte I, Parte II e Parte III siano completi e conservarli immediatamente alla temperatura di conservazione corrispondente.

Attenzione

1. Si prega di leggere attentamente il manuale di istruzioni prima dell'uso e di operare in stretta conformità con il manuale di istruzioni. Si raccomanda di eseguire l'elaborazione del campione su un banco pulito o in una cabina di sicurezza biologica.

2. Prestare attenzione a osservare se si verificano precipitazioni o torbidità nella soluzione conservata a temperatura ambiente (soprattutto quando la temperatura ambiente è bassa, come in inverno); è possibile effettuare un bagno d'acqua a 37°C finché la soluzione non diventa limpida, per evitare di compromettere l'effetto dell'uso.

3. Durante l'eluizione potrebbero rimanere delle sfere magnetiche residue, quindi evitare di aspirarle durante il prelievo dei campioni.

4. Si prega di sostituire frequentemente le punte per evitare contaminazioni incrociate quando si utilizza questo prodotto.

5. Per la vostra sicurezza e salute, quando utilizzate questo prodotto indossate sempre dispositivi di protezione individuale (DPI), come camici da laboratorio e guanti monouso.

6. Questo prodotto è destinato ESCLUSIVAMENTE alla ricerca!

Pre-preparazione

1. Attrezzatura fornita autonomamente: agitatore vortex, bagno d'acqua o bagno metallico, centrifuga, rack di separazione magnetica, estrattore automatico di acidi nucleici Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A o altre marche di estrattori di acidi nucleici completamente automatici.

2. Materiali di consumo auto-forniti: 10μL-1000μL punte con filtro a basso assorbimento, provette per centrifuga a basso assorbimento da 1,5 mL, provette per PCR o piastre a 96 pozzetti e relativi tappi o membrane per provette.

3. Reagenti autopreparati: etanolo assoluto (grado analitico), tampone 1×PBS (pH 7,4, privo di ioni Mg e Ca), acqua ultrapura.

4. Per il primo utilizzo, aggiungere etanolo anidro del volume indicato sull'etichetta o nelle istruzioni alle bottiglie di Soluzione di lavaggio A* e Soluzione di lavaggio B*, mescolare accuratamente prima dell'uso e contrassegnarli bene. Tappare bene la bottiglia dopo l'uso per mantenere il livello di etanolo nella bottiglia.

Estrazione manuale del DNA residuo

1. Elaborazione del campione

1.1 Se il campione contiene un contenuto di DNA relativamente elevato, come nel caso di un vaccino, diluirlo in una proporzione appropriata con tampone PBS 1× (pH 7.4, privo di ioni Mg e Ca) e quindi estrarre (la diluizione del campione serve a far sì che il valore di rilevamento rientri nell'intervallo lineare della curva standard e quindi a garantire l'accuratezza del rilevamento. Di solito si può prendere in considerazione una diluizione pari a 100 volte).

1.2 Se il campione da testare è una polvere secca, diluirla a 10 mg/mL o 100 mg/mL con acqua ultrapura prima dell'uso.

1.3 Se il campione presenta una matrice complessa, è necessario eseguire un esperimento di aggiunta e recupero standard per determinare la diluizione appropriata.

2. Aggiungere 100 μL di campione alla provetta da 1,5 mL, quindi aggiungere 100 μL di tampone di lisi, 10 μL di proteinasi K, agitare e mescolare per 10 secondi.

[Note]: Aggiungere 10 μL di proteinasi K se la concentrazione del campione proteico è 0-100 mg/mL e aggiungere 20 μL di proteinasi K se la concentrazione del campione proteico è 100-200 mg/mL.

3. Incubare a 60°C per 20 minuti.

4. Quindi aggiungere 400 microlitri della soluzione legante, 9 μL di glicogeno e 6 μL di sale di potassio Poli A, agitare e mescolare bene.

5. Aggiungere 20 μL di sfere magnetiche, agitare e mescolare bene, quindi lasciare riposare per 10 minuti. Agitare e mescolare per 10 secondi ogni 3 minuti.

[Note]: Le sfere magnetiche devono essere agitate prima dell'uso per garantire che siano completamente risospese. Dopo aver aggiunto i campioni 4-5 volte in una volta, si consiglia di mescolare di nuovo.

7. Centrifugare brevemente per far scendere la soluzione e posizionare la provetta da centrifuga sul rack magnetico per 1-2 minuti. Dopo che le sfere magnetiche sono completamente assorbite, rimuovere con attenzione il liquido.

8. Aggiungere 500 μL di soluzione di lavaggio A (prima dell'uso verificare se è stato aggiunto etanolo assoluto), agitare o agitare con vortex per miscelare e garantire che le sfere magnetiche siano disperse e che non vi siano sfere magnetiche aggregate sulla parete della provetta da centrifuga.

9. Centrifugare brevemente e posizionare la provetta da centrifuga su un supporto magnetico per 1-2 minuti. Dopo che le sfere magnetiche sono completamente assorbite, rimuovere con attenzione il liquido.

10. Aggiungere 500 μL di soluzione di lavaggio B (si prega di verificare se è stato aggiunto etanolo assoluto prima dell'uso), agitare o agitare con il vortex per miscelare e garantire che le sfere magnetiche siano disperse e che nessuna sfera magnetica si aggreghi sulla parete della provetta da centrifuga.

11. Centrifugare brevemente e posizionare la provetta da centrifuga su un supporto magnetico per 1-2 minuti. Dopo che le sfere magnetiche sono completamente assorbite, rimuovere con attenzione il liquido.

12. Per garantire che il liquido residuo venga rimosso il più possibile, centrifugare la provetta per 10 secondi rapidamente, posizionarlo su un supporto magnetico e utilizzare una pipetta da 10 μL per aspirare il liquido residuo.

13. Aprire il tappo del tubetto e lasciarlo a temperatura ambiente per 3 minuti finché l'etanolo non evapora completamente. Nessuna riflessione o crepa apparente sulla superficie delle sfere magnetiche indica che l'etanolo è completamente evaporato.

14. Togliere la provetta dal supporto magnetico, aggiungere 50-100 μL di eluato preriscaldato a 65°C, agitare e mescolare bene. Quindi centrifugare brevemente, incubare a 65°C per 5 minuti, agitare e mescolare una volta ogni 2-3 minuti.

15. Centrifugare brevemente di nuovo, posizionare la provetta da centrifuga su un supporto magnetico per 2 minuti. Dopo che le sfere magnetiche sono completamente assorbite, trasferire con attenzione la soluzione di DNA in una nuova provetta da centrifuga e conservarla a -20°C, o a -80°C per una conservazione a lungo termine.