Le perle di Concanavalina A (ConA) sono microsfere polimeriche superparamagnetiche che sono state accoppiate covalentemente con Concanavalina A (una lectina vegetale legante il mannosio/glucosio isolata dai semi delle piante di cereali) sulla loro superficie. Queste perle possedere diversi caratteristiche notevoli, tra cui la monodispersione e la forte reattività magnetica. Quando Ca²⁺ e Mg²⁺ sono presenti ioni, le sfere magnetiche ConA possono separare e purificare in modo efficiente e rapido varie biomolecole come polisaccaridi, glicoproteine ​​e glicolipidi sfruttando l'affinità tra la globulina A ConA e i gruppi terminali α-D-mannosio e α-D-glucosio.

Le sfere magnetiche ConA offrono un metodo conveniente per separare o fissare le cellule, assicurando una perdita minima di cellule durante le successive fasi di lavaggio. Inoltre, possono essere impiegate per la raccolta e la fissazione dei nuclei. Inoltre, queste sfere trovano utilità in tecniche innovative come CUT & Run e CUT & Tag, che sono approcci rivoluzionari utilizzati negli esperimenti ChIP-seq.

In sintesi, le sfere magnetiche ConA sono strumenti potenti per la purificazione efficiente delle biomolecole, la separazione e la fissazione cellulare, la raccolta dei nuclei e l'applicazione in tecniche sperimentali all'avanguardia.

Specifiche

Caratteristiche

Figure e tabelle

Tabella 1. Le perle Yeasen ConA hanno un elevato tasso di cattura. La quantità di Concanavalina A (ConA) utilizzata in proporzione alle microsfere è stata verificata per garantire la massima capacità di legame, prevenendo al contempo un'aggregazione eccessiva di perle magnetiche dopo il legame cellulare negli esperimenti CUT&Tag. Ad esempio, l'utilizzo di 10 μL di perle rivestite di ConA può legare una quantità di cellule equivalente ai livelli di E7, con un'efficienza di legame superiore al 98%.

Figura 1. Le perle Yeasen ConA mostrano un'elevata dispersività. Nel processo di etichettatura delle perle, è stato scelto un sigillante non biologico per garantire una chiusura efficiente senza essere influenzato dalle variazioni da lotto a lotto. Ciò garantisce un'eccellente sigillatura delle perle magnetiche, preservandone l'elevata monodispersità durante lo stoccaggio delle perle rivestite di ConA, il che è vantaggioso per un legame efficiente alle molecole di carboidrati negli esperimenti successivi.

Figura 2. Distribuzione del segnale della cromatina CUT&Tag utilizzando le perle Yeasen Con A.

Magazzinaggio

Questo prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra 2 e 8 °C per 2 anni.

Istruzioni

Le seguenti operazioni prendono come esempio la purificazione delle glicoproteine ​​o l'isolamento delle cellule, per quanto riguarda TAGLIA&TAGLIA esperimenti , vedere Yeasen Cat# 12598ES per il protocollo.

1. Preparazione dei buffer

1）Fornito dal cliente

1. Materiali richiesti non inclusi: supporto magnetico, provette Eppendorf, provette PCR, supporti magnetici, termociclatori ecc.
2. Equilibrare il Perline a temperatura ambiente per almeno 30 minuti. Risospendere accuratamente le sfere agitando il flacone o agitandolo.

1. Gestione dei campioni（ prendendo come esempio le cellule dei mammiferi ）

1. Preparare cellule di mammifero (1,0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ cellule), centrifugare (4℃，600×g, 3~5 min) e attentamente scartare il surnatante.
2. Aggiungere 140 μL di tampone legante, mescolare bene e risospendere le cellule, centrifugare e raccogliere (4℃, 600×g, 3~5 min), con attenzione scartare il surnatante.
3. Aggiungere 90 μl di tampone legante, mescolare bene e risospendere le cellule.
   Attenzione: le cellule di mammifero strettamente aderenti possono essere ottenute tramite digestione parziale utilizzando un enzima come la tripsina. Per i tessuti animali, le cellule vegetali o le cellule fungine, l'ottenimento di cellule disperse o protoplasti richiede spesso trattamenti speciali adattati alle loro caratteristiche specifiche.

1. Preparare le perle ConA

1. Pipettare delicatamente le perle ConA fino a completa sospensione, posizionare 10 μL della sospensione di perle in una nuova provetta per centrifuga da 200 μL.
2. Aggiungere 40 μl di tampone legante, mescolare bene e lasciare sul supporto magnetico per 1 minuto; scartare il surnatante dopo che le sfere magnetiche si sono adsorbite sulla parete laterale della provetta da centrifuga.
3. Aggiungere 10 μl di tampone legante, mescolare bene e risospendere le microsfere ConA.

1. Rilegatura campione

1. Aggiungere il campione cellulare preparato alle sfere pretrattate, pipettare delicatamente le sfere risospese, quindi incubare su un miscelatore capovolto (temperatura ambiente 30 min o 4℃ durante la notte).
2. Posizionare su un supporto magnetico per 1 minuto, attendere che le sfere magnetiche vengano assorbite dalla parete laterale della provetta da centrifuga, quindi scartare con cura il surnatante.
3. Aggiungere 500 μL di tampone di eluizione per il complesso di perle cellula-ConA e Pipettare delicatamente per risospendere le perle, quindi Posizionare su un supporto magnetico per 1 minuto, attendere che le sfere magnetiche vengano assorbite dalla parete laterale della provetta da centrifuga, quindi scartare con cura il surnatante.
4. Ripetere il passaggio 3) per altre tre o quattro volte.

1. Eluizione

1. Per le glicoproteine, aggiungere 50~250 μL di tampone di eluizione, pipettare delicatamente le perle risospese, quindi incubare su un miscelatore invertito (temperatura ambiente per 10~30 min). Dopo la miscelazione invertita, lasciare su un supporto magnetico per 1 min, raccogliere il surnatante in una nuova provetta da 1,5 mL per sottoporlo a SDS-PAGE o Western blot.
2. Per le cellule non è necessaria l'eluizione.

Appunti

1. Equilibrare il ConA perle a temperatura ambiente prima dell'uso.
2. Evitare il congelamento, altrimenti si verifica il degrado del materiale delle perle o la perdita di attività.
3. Per essere attivo, ConA necessita della presenza di ioni Ca2+ e Mn2+, pertanto durante l'esperimento si devono evitare reagenti contenenti EDTA o altri chelanti di ioni metallici.
4. Quando vengono incubate con le cellule, le sfere ConA possono aggregarsi, il che è normale e non influisce sul normale utilizzo delle sfere magnetiche.
5. Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
6. Per la vostra sicurezza, operate indossando camici da laboratorio e guanti monouso.

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