Il gel di poliacrilammide (gel PAGE) è spesso utilizzato per l'elettroforesi proteica per realizzare la separazione delle proteine. Questo tipo di gel è generalmente composto da gel concentrato e gel di separazione. Il primo svolge il ruolo di concentrare i campioni di proteine, mentre il secondo separa proteine ​​di diverse dimensioni in base alla concentrazione del monomero di acrilammide e dell'agente di reticolazione N,N-metilenbisacrilammide (metilenacrilammide) utilizzato nel gel.

Questo kit fornisce una varietà di reagenti necessari per una rapida preparazione del gel PAGE. Gli utenti devono solo preparare la propria attrezzatura di preparazione del gel per preparare il gel, il che semplifica notevolmente il processo di preparazione del gel. Il gel preparato da questo kit può essere utilizzato solo per l'elettroforesi del gel PAGE denaturante. Questa specifica può preparare circa 125 pezzi di mini gel (calcolati per gel spesso 0,75 mm).

Specifiche

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Il prodotto viene spedito con ghiaccio e può essere conservato a 2℃~8℃ per 1 anno.

Istruzioni: Si consiglia di non configurare troppi pezzi di gel contemporaneamente per evitare di aggiungere la soluzione superiore troppo tardi (si consigliano al massimo 2-3 pezzi)

1. Selezionare la concentrazione del gel appropriata in base al peso molecolare della proteina target (fare riferimento alla tabella 1)

2.Processo di produzione del gel (prendiamo come esempio un pezzo di minigel da 0,75/1,0/1,5 mm)

2.1 Prendere un volume uguale di tampone di gel di separazione e di soluzione di gel di separazione e mescolarli, ovvero prendere rispettivamente 2,0/2,7/4,0 mL delle due soluzioni.

2.2 Pesare 0,1 g di persolfato di ammonio e scioglierlo in 1 mL di acqua deionizzata. Il cliente deve acquistare il persolfato di ammonio da solo.

2.3 Aggiungere 35/45/70 μL di APS alla soluzione miscelata nel passaggio 1 (la quantità di APS utilizzata può essere ridotta della metà se la solidificazione è troppo rapida) e mescolare completamente.

2.4 Iniettare la soluzione nel passaggio 2 nella piastra di vetro per la produzione del gel. Si noti che il gel concentrato deve essere iniettato nello stampo per gel entro 2 minuti dall'aggiunta del gel di separazione e che il versamento del gel concentrato deve essere lento per evitare la miscelazione del gel concentrato e del gel di separazione. Se l'individuo trova difficile la configurazione, può anche essere adattato per configurare il gel concentrato dopo la sigillatura con etanolo.

2.5 Preparazione del gel concentrato: prendere un volume uguale di tampone gel concentrato e di soluzione gel concentrata, ovvero prendere rispettivamente 0,5/0,75/1,0 mL delle due soluzioni, quindi aggiungere 10/13/18 μL di APS e mescolare bene.

2.6 Iniettarlo nella piastra di vetro per la produzione del gel e inserire i denti del pettine (non usare una forza eccessiva per inserire delicatamente i denti del pettine).

2.7 Dopo che il gel concentrato si è solidificato per 15 minuti, i denti del pettine possono essere rimossi e utilizzati per l'elettroforesi. Nota: si prega di provare a utilizzare un tampone di elettroforesi appena preparato.

Appunti

1. Si suggerisce che la tensione durante l'elettroforesi sia compresa tra 100 e 120 V. Se è necessario accelerare la velocità dell'elettroforesi, può essere aumentata a 150 V.

2. Prima di riempire il gel, assicurarsi di bilanciare la soluzione di gel a temperatura ambiente (ad esempio, mantenerla per diversi minuti) per evitare efficacemente la formazione di bolle nel gel.

3. Il cliente deve acquistare il persolfato di ammonio da solo. Consigliamo di utilizzare il prodotto con Cat#A3678 di Sigma.

4. La quantità di soluzione di persolfato di ammonio è solo di riferimento e la quantità effettiva può essere aumentata o diminuita in base alle abitudini sperimentali e all'esperienza personali. L'aggiunta di più persolfato di ammonio può accelerare la velocità del gel e viceversa. La velocità di coagulazione del gel PAGE è strettamente correlata alla temperatura e alla quantità di persolfato di ammonio.

5. A questo prodotto è stata aggiunta una quantità appropriata di sostituti TEMED. Se è necessario accelerare ulteriormente la velocità del gel, è possibile aggiungere una quantità appropriata di TEMED come richiesto prima dell'erogazione.

6. Esiste una significativa correlazione positiva tra la solidificazione del gel e la temperatura. Nelle stesse condizioni, più alta è la temperatura, più veloce è la velocità di solidificazione.

7. Il gel concentrato colorato può produrre una piccola quantità di precipitazione durante la conservazione, il che è un fenomeno normale. Sentiti libero di usarlo.

8. L'APS è stato conservato a -20℃Per comodità, l'APS che è stato aperto ed è in uso può essere conservato a 4℃.

9. Si prega di indossare i DPI necessari, come camice e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!

10. Solo per uso di ricerca!

Tabella 1 Intervallo di separazione di riferimento del gel SDS-PAGE con diversa concentrazione

Documenti:

Scheda di sicurezza

20325-A-MSDS-CN20250110

20325-B-MSDS-CN20250110

20325-C-MSDS-CN20250110

20325-D-MSDS-CN20250110

Manuali

20325_Manuale_CN20241218_IT

Citazioni e riferimenti:

[1] Su G, Wang W, Zhao X, et al. La regolazione trascrizionale multistrato dipendente dall'architettura dell'enhancer orchestra la differenziazione precoce del lignaggio delle cellule staminali embrionali (ESC) indotta dalla segnalazione RA. Nucleic Acids Res. 2021;49(20):11575-11595. doi:10.1093/nar/gkab1001(IF:16.971)

[2] Li M, Niu Y, Tian L, et al. L'astragaloside IV allevia la senescenza dei macrofagi e la perdita ossea indotta da d-galattosio nei topi attraverso il pathway STING/NF-κB. Int Immunopharmacol. 2024;129:111588. doi:10.1016/j.intimp.2024.111588(IF:5.6)

[3] Song M, Qian C, Zhang T, et al. L'estratto acquoso di Salvia mitiorrhiza Bunge attenua l'infiltrazione dei macrofagi associati al tumore e potenzia l'immunoterapia anti-PD-L1 nel cancro del colon-retto modulando la cascata Cox2/PGE2. J Ethnopharmacol. 2023;316:116735. doi:10.1016/j.jep.2023.116735(IF:5.4)

[4] Zang C, Liu H, Ju C, et al. L'estratto di Gardenia jasminoides J. Ellis ha alleviato il danno alla sostanza bianca promuovendo la differenziazione delle cellule precursori degli oligodendrociti tramite la soppressione della neuroinfiammazione. Food Funct. 2022;13(4):2131-2141. Pubblicato il 21 febbraio 2022. doi:10.1039/d1fo02127c(IF:5.396)