Il kit substrato chemiluminescente ECL migliorato è progettato per rilevare anticorpi e antigeni associati direttamente o indirettamente marcati con perossidasi di rafano (HRP). Il principio del kit substrato chemiluminescente ECL migliorato è che le proteine ​​o gli acidi nucleici sono stati trasferiti alla membrana impressa dopo l'elettroforesi e le proteine ​​bersaglio sulla membrana sono state legate dall'anticorpo primario e dall'anticorpo secondario marcati con HRP, oppure gli acidi nucleici sulla membrana sono stati legati direttamente o indirettamente da sonde marcate con HRP. Dopo aver lavato la membrana, la soluzione di lavoro ECL preparata dal prodotto è stata utilizzata per incubare la membrana a temperatura ambiente per diversi minuti. La membrana impressa è stata avvolta con pellicola di plastica e fissata alla cassetta di esposizione ai raggi X. Quindi la pellicola radiografica è stata premuta sulla membrana in una camera oscura ed esposta per diversi secondi fino a diverse ore. Dopo lo sviluppo e il fissaggio, le bande di proteine ​​o acidi nucleici possono essere chiaramente visualizzate sulla pellicola radiografica.

Questo kit ha un esclusivo sistema di substrato luminescente, che riduce lo sfondo dell'esposizione mentre introduce un nuovo ossidante migliora notevolmente la stabilità del kit, consentendogli di essere stabile a temperatura ambiente fino a un anno. Oltre ai raggi X, la scansione CCD fluorescente può anche essere utilizzata direttamente principalmente per il rilevamento WB e il sistema di rilevamento immunitario a chemiluminescenza.

Caratteristiche

Grazie all'elevata sensibilità e all'elevato rapporto segnale/rumore, è in grado di rilevare antigeni di grado medio.

Illumina rapidamente e intensamente, la banda di pellicola impressa può essere osservata sotto una lampada fluorescente.

I campioni proteici convenzionali più elevati sono particolarmente adatti per rilevare l'abbondanza del bersaglio.

Nuovo ossidante, stabile a temperatura ambiente fino a un anno.

Applicazioni

Chemiluminescenza ELISA

Macchia occidentale

Blot a punti - DNA/RNA

Southern blot-DNA

Blot del nord-RNA

Specifiche

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Il prodotto viene spedito a temperatura ambiente e può essere conservato a temperatura ambiente per un anno. Se non utilizzato per un lungo periodo, si consiglia di conservarlo a 2℃~8℃ per estendere il periodo di validità.

Note: 36222-A deve essere conservato al riparo dalla luce!

Istruzioni (ad esempio, pellicola radiografica)

1. Elettroforesi di routine, membrana di trasferimento, anticorpo marcato con HRP o sonda di acido nucleico marcata con HRP, incubazione e membrana di lavaggio.

Note: la soluzione luminescente ECL è il substrato colorato dell'HRP, quindi il sistema di rilevamento deve essere basato su un anticorpo marcato con enzima HRP o su una sonda di acido nucleico.

2. Contemporaneamente al lavaggio finale della membrana, è stata preparata fresca la soluzione di lavoro luminescente (100-200 μL di soluzione di lavoro luminescente/cm2 di membrana): prendere lo stesso volume di reagente A e B, mescolare bene per un utilizzo successivo.

Note: Prendere il Reagente A e il Reagente B deve usare punte diverse. Si raccomanda di usare il fluido di lavoro immediatamente. Può essere ancora usato dopo alcune ore a temperatura ambiente, ma la sensibilità è leggermente ridotta.

3. Utilizzare pinzette piatte per estrarre la membrana, posizionarla su carta da filtro per far scolare la lozione, non far asciugare completamente la membrana. Immergere completamente la membrana nella soluzione di lavoro luminescente, contatto sufficiente con il fluido di lavoro luminescente. Incubare a temperatura ambiente per 1-2 minuti e preparare immediatamente l'esposizione della compressa.

4.Prendere la membrana con le pinzette e adagiarla su carta da filtro per drenare il fluido di lavoro luminescente. Ma non lavare via il fluido luminescente.

5. Disporre un pezzo di pellicola di plastica più grande della membrana sulla superficie interna dell'obscura della pellicola radiografica. Fissare la membrana impressa alla pellicola di plastica, piegare completamente la pellicola di plastica attorno alla membrana impressa e rimuovere la bolla di gas e piegare, tagliare il bordo della pellicola di plastica in eccesso. Utilizzare carta da filtro per aspirare il fluido di lavoro luminoso in eccesso. Fissare la pellicola di plastica che copre la membrana impressa nell'obscura con del nastro adesivo, con la banda proteica rivolta verso l'alto.

6. Un pezzo di pellicola radiografica è stato preso dalla camera oscura e posizionato sulla membrana avvolta. La pellicola è stata pressata ed esposta per 30 secondi - 2 minuti. Quindi la pellicola è stata sviluppata e fissata.

Note: Il tempo di esposizione deve essere regolato in base all'intensità dell'esposizione.Se lo sfondo è troppo alto, utilizzare due pellicole radiografiche contemporaneamente.

Altri metodi di esposizione

Se si utilizza la fotografia CCD: la membrana può essere posizionata nel fluido di lavoro, dopo l'avvio secondo l'uso delle istruzioni, rimuovere la pellicola, scattare foto. Inoltre, i parametri di misurazione della macchina possono essere regolati in base alla situazione per migliorare il rapporto segnale/rumore.

Appunti

1. Si dovrebbero evitare bolle durante il trasferimento, la sigillatura e l'incubazione della membrana. Inoltre, indossare guanti eviterà di lasciare impronte digitali sulla membrana e la manterrà pulita.

2. L'esposizione prolungata o l'eccesso di proteine ​​approfondiranno lo sfondo e faranno perdere la relazione lineare al cambiamento di intensità della banda. La sottoesposizione sfoca le bande.

3. Un po' di pellicola di plastica potrebbe spegnere la fluorescenza quando si avvolge la membrana impressa. Si dovrebbe scegliere una pellicola di plastica di alta qualità.

4. Evitare di posizionare più membrane nella stessa scatola di lavaggio, poiché l'adsorbimento o l'attrito reciproco potrebbero causare uno sfondo profondo.

5. La posizione e la dimensione delle bande sulla pellicola possono essere determinate con precisione utilizzando marcatori proteici precolorati visibili e tag di esposizione tramite autoradiografia fluorescente.

6. Utilizzare un sistema biotina-avidina ed evitare di utilizzare la chiusura del latte, che potrebbe causare un livello di fondo troppo elevato.

7. Le particelle di ossido di metallo possono causare macchie granulari sulla membrana. Evitare di usare forbici e pinzette arrugginite. Usare pinzette piatte di plastica.

8. L'azide di sodio (NaN3) può inibire l'attività dell'HRP; se si desidera recuperare la sonda o l'anticorpo marcati con HRP, evitare di utilizzare NaN3, se necessario, non più dello 0,01%.

9. Questo prodotto non presenta particolari tossicità, secondo i comuni trattamenti chimici.

10. Si prega di indossare i DPI necessari, come camice e guanti, per garantire la propria salute e sicurezza!

11. Solo per uso di ricerca!

Documenti:

Scheda di sicurezza

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Manuali

36222_Manuale_HB221212_IT

Citazioni e riferimenti:

[1] He X, Li J, Zhou G, et al. Controllo dei ritmi e della memoria dell'ippocampo mediante plasticità sinaptica nei neuroni interneuronali inibitori. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)

[2] Wang X, Zhang S, Jin D et al. L'agonista del recettore μ-oppioide facilita la formazione di cellule tumorali circolanti nel cancro alla vescica tramite il percorso MOR/AKT/Slug: uno studio completo che include uno studio randomizzato controllato.Cancer Commun (Londra). 2023;43(3):365-386. doi:10.1002/cac2.12408(IF:16.2)

[3] Li Y, Zhou S, Song H, Yu T, Zheng X, Chu Q. Nanoparticelle di CaCO3 incorporate con KAE per abilitare la terapia del cancro con sovraccarico di calcio amplificato. Biomateriali. 2021;277:121080. doi:10.1016/j.biomaterials.2021.121080(IF:12.479)

[4] Xu Z, Xu J, Sun S, et al. Mecheliolide provoca la morte cellulare immunogenica mediata da ROS e guidata da ERS nel carcinoma epatocellulare. Redox Biol. 2022;54:102351. doi:10.1016/j.redox.2022.102351(IF:11.799)

[5] Cai Z, Zhang Y, Zhang W, et al. La ritenzione di arsenico negli eritrociti e l'eccessiva eritrofagocitosi sono correlate a un basso stato di selenio tramite un'omeostasi redox compromessa. Redox Biol. 2022;52:102321. doi:10.1016/j.redox.2022.102321(IF:11.799)

[6] Kaushik AC, Wu Q, Lin L, et al. La profilazione degli ncRNA esosomiali dell'infezione micobatterica ha identificato miRNA-185-5p come un nuovo biomarcatore per la tubercolosi. Brief Bioinform. 2021;22(6):bbab210. doi:10.1093/bib/bbab210(IF:11.622)

[7] Hu P, Li H, Sun W, et al. Il disturbo lisosomiale associato al colesterolo innesca la morte cellulare della neoplasia ematologica: analisi dinamica degli effetti citotossici di LW-218. Acta Pharm Sin B. 2021;11(10):3178-3192. doi:10.1016/j.apsb.2021.02.004(IF:11.614)

[8] Wang X, Ni J, You Y, et al. Il rilevamento LPS mediato da SNX10 causa disfunzione della barriera intestinale tramite una cascata di segnalazione dipendente dalla caspasi-5. EMBO J. 2021;40(24):e108080. doi:10.15252/embj.2021108080(IF:11.598)

[9] Jiang K, Chen H, Fang Y, et al. L'ANGPTL1 esosomiale attenua le metastasi epatiche del cancro colorettale regolando il modello di secrezione delle cellule di Kupffer e impedendo la permeabilità vascolare indotta da MMP9. J Exp Clin Cancer Res. 2021;40(1):21. Pubblicato il 7 gennaio 2021. doi:10.1186/s13046-020-01816-3(IF:11.161)

[10] Zhang S, Yang Z, Bao W, et al. SNX10 (ordinamento nexina 10) inibisce l'inizio e la progressione del cancro del colon-retto controllando la degradazione autofagica di SRC. Autofagia. 2020;16(4):735-749. doi:10.1080/15548627.2019.1632122(IF:11.059)

[11] Liu L, Liang L, Yang C, Zhou Y, Chen Y. Le vescicole extracellulari di Fusobacterium nucleatum compromettono la barriera intestinale prendendo di mira il percorso di morte cellulare mediato da RIPK1. Microbi intestinali. 2021;13(1):1-20. doi:10.1080/19490976.2021.1902718(IF:10.245)