Descrizione
Quando le cellule subiscono l'apoptosi, attivano gli enzimi endonucleasi che tagliano il DNA genomico tra i nucleosomi. Una scala di DNA di 180-200 bp può essere rilevata tramite elettroforesi dopo l'estrazione del DNA durante l'apoptosi.
Il kit per l'analisi dell'apoptosi cellulare (FITC) TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) può essere utilizzato per rilevare la rottura del DNA nucleare nelle cellule tissutali durante la fase apoptotica tardiva. Il principio è che FITC-12-dUTP viene inserito nel terminale 3'-idrossile (3'-OH) del DNA genomico esposto durante la rottura del DNA sotto l'azione della Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT). Ciò può essere rilevato mediante microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Questo kit ottimizza la reazione di marcatura utilizzando FITC-12-dUTP e dNTP non marcato al rapporto ottimale per l'incorporazione dei nucleotidi al 3' -OH terminale, dando origine a una "coda di etichettatura" più lunga all'estremità dello stesso frammento di DNA rotto. La “coda dell’etichettatura” riduce l'ingombro sterico dei gruppi marcati sul dNTP adiacente, aumenta il numero di gruppi fluorescenti su ciascun frammento rotto e riduce l'aggregazione e lo spegnimento che possono essere causati dai gruppi fluorescenti adiacenti, migliorando così la sensibilità di rilevamento e riducendo le reazioni aspecifiche.
Questo kit ha un'ampia gamma di applicazioni. Può essere utilizzato per rilevare l'apoptosi in sezioni congelate o in paraffina, così come in cellule aderenti alla coltura o in situazioni di cellule in sospensione.
Caratteristiche
- I reagenti contenuti in questo kit sono forniti in forma liquida per facilitarne l'utilizzo.
- Il kit può essere utilizzato per diversi scopi: citometria a flusso, microscopia a fluorescenza per il rilevamento.
- Al microscopio a fluorescenza la distinzione cromatica è evidente.
Applicazioni
- Questo kit può essere utilizzato per la citometria a flusso e la microscopia a fluorescenza.
- Questo kit è in grado di rilevare l'apoptosi precoce delle cellule.
- Questo kit è in grado di distinguere tra cellule apoptotiche tardive e cellule necrotiche.
Specifiche
| Applicazione | L'applicazione verificata del kit era quella di rilevare le cellule apoptotiche mediante citometria a flusso o citologia a immunofluorescenza. |
| Modulo di imballaggio | Bottiglia |
Componenti
| Componente | Nome | 40306ES20 (20T) | 40306ES50 (50T) | 40306ES60 (100T) |
| 40306-A | 5×Tampone di equilibratura | 750 microlitri | 1,25 mL×2 | 1,25 ml×3 |
| 40306-B | Miscela di etichettatura FITC-12-dUTP | 100 microlitri | 250 microlitri | 250 μL×2 |
| 40306-C | Enzima TdT ricombinante | 20 microlitri | 50 microlitri | 50 μL×2 |
| 40306-D | Proteinasi K (2 mg/mL) | 40 microlitri | 100 microlitri | 100 μL×2 |
| 40306-E | DNasi I (1 U/μL) | 5 microlitri | 12,5 μL | 25 microlitri |
| 40306-F | Tampone DNasi I 10 × | 100 microlitri | 250 microlitri | 500 microlitri |
Spedizione e stoccaggio
Il prodotto viene spedito con ghiaccio secco e può essere conservato a -15℃ ~ -25℃ per 1 anno.
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