Descrizione
Il kit di rilevamento del micoplasma GMyc-PCR utilizza principalmente il metodo PCR per rilevare l'infezione da micoplasma di vari materiali biologici (come colture cellulari, secrezioni animali sperimentali, siero animale, ecc.). Combina diversi vantaggi: sensibile, specifico, rapido e può essere rilevato direttamente con i supernatanti delle colture cellulari. Questo prodotto rileva il micoplasma in materiali biologici come le cellule coltivate mediante il metodo PCR. I primer utilizzati sono progettati in base alla regione conservata della sequenza 16S-23S rRNA del micoplasma e amplificano specificamente solo il DNA del micoplasma, con elevata sensibilità e specificità di rilevamento. L'amplificazione PCR e l'analisi dell'elettroforesi richiedono solo poche ore e l'operazione è comoda e semplice.
La coltura cellulare è un esperimento comune nella ricerca sulle scienze della vita. A differenza di altri metodi sperimentali comunemente usati, la coltura cellulare è un processo dinamico continuo e le cellule spesso rispondono a errori di manipolazione o contaminanti che spesso mostrano stati cellulari anomali o aspetto del mezzo. Se è contaminata da micoplasmi, la morfologia cellulare non presenta cambiamenti evidenti ed è facile trascurarla. Spesso non viene individuata finché l'inquinamento non è molto grave. Possono esserci centinaia di micoplasmi sulla membrana cellulare contaminata, questi micoplasmi competono per i nutrienti e rilasciano metaboliti tossici, influenzando seriamente i risultati sperimentali.
Studi hanno dimostrato che almeno 20 tipi di micoplasma possono contaminare le cellule, tra cui i più comuni sono: Mycoplasma orale (M. orale), Mycoplasma arginina (M. arginino), Mycoplasma hyorhinis (M. hyorhinis), Mycoplasma fermentum (M. fermentano), Mycoplasma hominis (M. uomo), Mycoplasma salivarius (M. salivario), Mycoplasma polmonare (M. polmone) e Mycoplasma pera (M. pirum). Il tasso di contaminazione da micoplasma delle cellule coltivate varia dal 4% al 92%. Le fonti di contaminazione includono l'ambiente di lavoro, l'operatore stesso (alcuni micoplasmi sono la normale flora del corpo umano), il terreno di coltura, il siero, la contaminazione incrociata delle cellule, l'attrezzatura sperimentale e la contaminazione utilizzata del tessuto o dell'organo originale da cui sono state preparate le cellule.
Identificare la causa sottostante dei problemi durante la coltura cellulare è un compito difficile e che richiede molto tempo, in cui si dovrebbero sospettare eventuali cambiamenti improvvisi e sono necessarie buone pratiche di test e test regolari per la contaminazione da micoplasma. Esistono molti metodi per la rilevazione del micoplasma, come la coltura diretta, la colorazione a fluorescenza del DNA, ELISA e metodi PCR.
Caratteristica
- I primer utilizzati sono stati progettati in base alla regione conservata della sequenza dell'rRNA 16S-23S del Mycoplasma
- Solo il DNA del micoplasma amplificato specificamente
- Ottima sensibilità e specificità
- Sono state rilevate più di 20 specie di micoplasmi
Applicazione
- Rilevamento del micoplasma
Componenti
Componenti n. | Nome | 40601ES10 (10 analisi) | 40601ES20 (20 analisi) |
40601-A | Miscela PCR GMyc-1st | 250 µl | 2×250 µL |
40601-B | Miscela di PCR GMyc-2nd | 250 µl | 2×250 µL |
40601-C | Modello di controllo positivo N | 20 µl | 20 µl |
[Note] 1. Quando non viene utilizzato per un lungo periodo, può essere conservato congelato a -85~-65℃.
2. La reazione PCR è estremamente sensibile.Per evitare falsi positivi, quando si aggiungono i campioni, alla fine viene aggiunto un controllo positivo.
Magazzinaggio
Questo prodotto può essere conservato a -25~-15℃ per 18 mesi. Se non viene utilizzato per un lungo periodo, si prega di tenerlo al riparo dalla luce.
Cifre
Figura 1. Il risultato dell'elettroforesi del PCR Mycoplama Test Kit.
Il primo elettroforetagramma circolare è stato mostrato nella Figura 1A e il secondo elettroforetagramma circolare è stato mostrato nella Figura 1B. (M: marcatore da 1 kb, 1-2: controlli positivi, 3: controllo negativo)
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