Descrizione
Il MycAway™ Mycoplasma qPCR Detection Kit è un prodotto progettato per il rilevamento qualitativo della contaminazione da micoplasma in varie fonti, tra cui materie prime, banche cellulari, semi di virus, soluzioni di raccolta virale o cellulare e cellule utilizzate nei trattamenti clinici, tra gli altri. Questo kit utilizza sonde fluorescenti Taqman (FAM e VIC) e impiega tecniche di reazione a catena della polimerasi (PCR) multiple per rilevare separatamente il target e il controllo interno. È stato convalidato per specificità, limite di rilevamento e robustezza secondo gli standard EP <2.6.7>, dimostrando elevata sensibilità, specificità, efficienza e sicurezza. Il limite di rilevamento è uguale o inferiore a 10 CFU/mL.
Per l'estrazione di acidi nucleici, questo prodotto può essere utilizzato insieme al kit di preparazione del campione di DNA residuo magnetico MolPure® (Cat#18461), che impiega metodi di estrazione manuali. In alternativa, gli acidi nucleici nei campioni possono essere estratti automaticamente utilizzando l'estrattore automatico di acidi nucleici AutoPure 32A (Cat#80501) e il kit di preparazione del campione di DNA residuo MolPure® Mag32 FA (Cat#18462). È importante notare che i kit contenenti Cat#18461 e Cat#40619 sono stati sottoposti a una convalida completa; per informazioni dettagliate sulla convalida, contattare il nostro supporto tecnico. Dopo aver pretrattato i campioni per rimuovere le impurità interferenti e ottenuto acidi nucleici purificati, viene eseguita una reazione qPCR utilizzando un amplificatore PCR in tempo reale e il segnale di fluorescenza dalla sonda viene raccolto e analizzato.
| N. di cat. | 40619ES25 / 40619ES60 |
| Misurare | 25 T / 100 T |
| Rilevamento Limite | 10 UFC/mL |
| Rilevare metodo | PCR-q metodo (Taqman fluorescente) |
| Durata | 4 ore |
| Fluorescente sonda | Famiglia (Bersaglio canale)；VIC (Interno canale) |
| Coperto micoplasma | ≥ 100 |
| Validazione | convalidato secondo A EP <2.6.7> |
Componenti
| Componenti n. | Nome | 40619ES25 | 40619ES60 |
| 40619-A | Tampone di reazione MyqPCR 4× | 250 microlitro | 1 ml. |
| 40619-B | MyPrimer e sonda MESCOLARE | 25 microlitro | 100 microlitro |
| 40619-C* | Controllo interno (CI) | 25 microlitro | 100 microlitro |
| 40619-D** | Controllo positivo (PC) | 500 microlitro | 2 ml. |
| 40619-E*** | Diluizione del DNA respingente | 1 ml. | 4×1 ml |
| 40619-F**** | Acqua ultrapura | 500 microlitro | 2×1 ml |
*IC: Interno controllare;
**PCS: Positivo controllare soluzione ,IL concentrazione È 1.000 copie/µL.
***DNA Diluizione buffer: usato per CIRCUITO INTEGRATO diluizione E IL modello Di NTC E NCS.
****Ultrapuro acqua: usata per IL preparazione Di PCR-q Mescolare.
Magazzinaggio
Questo prodotto deve essere conservato a una temperatura compresa tra -25 e -15 °C per 2 anni.
*Al ricevimento del kit, controllare che tutti i componenti siano completi e conservarli immediatamente a -25~-15℃ condizione se non si esegue il test immediatamente. Si prega di notare che 40619-B deve essere conservato al riparo dalla luce.
Istruzioni
- Preparativi prima dell'esperimento
1) Preparare i reagenti e i materiali necessari che verranno utilizzati nell'esperimento.
2) Confermare l'idoneità di lo strumento qPCR
Questo kit può essere utilizzato sui tipi di strumenti qPCR come di seguito:
- Bio-Rad: CFX96
- Thermo Scientific: sistema PCR in tempo reale 7500;QuantStudio™5;
- Metodo sperimentale
1) Estrazione del DNA
Ti consigliamo di utilizzare ' Kit di preparazione del campione di DNA residuo magnetico (Cat#18461ES per estrazione manuale e Cat#18462ES per estrazione automatica) per il Estrazione del DNA, Voi Potere visita ' http:/www.yeasenbiotech.com ' per IL
informazioni dettagliate e l'acquisto.
Il kit (Cat#40619ES) contiene un controllo interno (IC). Se si aggiunge l'IC ai campioni prima dell'estrazione del DNA, è possibile verificare il processo completo (inclusa l'estrazione del DNA e la reazione qPCR). Se si aggiunge l'IC al master mix qPCR
direttamente, l'IC fungerà solo da controllo qPCR.
2) Preparazione della miscela qPCR
- In base alla quantità del campione che includeva il controllo positivo (PCS), il controllo senza template (NTC), il controllo negativo soluzione di controllo (NCS) e campione di prova (TS) per calcolare il numero di reazioni. Preparare 2 reazioni in parallelo per
ogni campione in generale.
* PCS: Positivo controllare soluzione;NTC:No modello controllo; NCS: negativo controllare soluzione;TS:Test campione. Lì È NO Bisogno A eseguire
IL campione estrazione per PZ E NTC, ma NCS E STUDENTI Sono necessario.
Pozzi di reazione (M1) = (1×NCS + N×TS） ×2
Pozzi di reazione (M2) = (1×PCS + 1×NTC) ×2
Pozzi di reazione (M3) = (1×PCS + 1×NTC+ N×TS) ×2
- Pre-scongelare la quantità richiesta di reagenti su ghiaccio, secondo la progettazione dell'esperimento e le tabelle sottostanti.
- Calcolare la quantità di qPCR Mix in base al numero di reazioni. Si prega di notare che, se il kit verrà utilizzato per attività GMP come il rilascio del prodotto, si raccomanda di utilizzare la Tabella 1 e 2 per la preparazione; Se il kit sarà Appena utilizzato per la ricerca e non è necessario aggiungere IC prima dell'estrazione dopo la valutazione, quindi seguire la Tabella 3 per
la preparazione. Si prega di notare che non tutti i M1, M2 e M3 Sono necessario per Essere preparare.
| Componente | Volume (reazioni 1×40μL) | Volume (M1×40μL) |
| 4× Tampone di reazione MyqPCR | 10 microlitro | (M1+2) ×10 microlitro |
| MyPrimer e sonda MESCOLARE | 1 microlitro | (M1+2) ×1 microlitro |
| ROX | 0,8 ml/0 μL** | (M1+2) ×0.8 ml/0 microlitro |
| Acqua purificata | Fino a 20 microlitro | Fino a (M1+2) ×20 microlitro |
| Totale | 20 microlitro | (M1+2) ×20 microlitro |
Tabella 1 Sistema di miscelazione qPCR per M1
*IL configurazione sistema In Tavolo 1 è basato SU IL premessa Quello CIRCUITO INTEGRATO È aggiunto Prima estrazione per Entrambi NCS E TS, quindi Esso È non necessario
A aggiungere CIRCUITO INTEGRATO Quando PCR-q Mescolare preparazione. CI aggiungendo metodo Prima estrazione: Per prima cosa diluire CIRCUITO INTEGRATO di 20 volte con Il DNA diluente e aggiungere 1 μl
diluito CIRCUITO INTEGRATO in ogni 100μL test campione per IL ulteriore estrazione.
**Questo kit fa non contenere ROX Riferimento Tintura. Se ROX riferimento tintura È necessario per IL Vero Tempo PCR amplificatori Quello Voi Sono attualmente utilizzando, 50×ROX Riferimento Tintura (Cat#10200ES) è raccomandato per utilizzo. In Questo caso, il aggiunto volume È 0,8μL, COME mostrato In Tavolo 1. Se usando altro
marche Di ROX prodotti, per favore fare riferimento A loro istruzioni per ROX aggiunta.Se NO ROX riferimento tintura È richiesto, il aggiunto volume È 0 ml.
| Componente | Volume (reazioni 1×40μL) | Volume (M2×40μL) |
| 4× Tampone di reazione MyqPCR | 10 microlitro | (M2+2) ×10 microlitro |
| MyPrimer e sonda MESCOLARE | 1 microlitro | (M2+2) ×1 microlitro |
| Controllo interno (CI) | 1 microlitri* | (M2+2) ×1 ml/0 microlitro |
| ROX | 0,8 ml/0 μL** | (M2+2) ×0.8 ml/0 microlitro |
| Purificato acqua | Fino a 20 microlitro | Fino a (M2+2) ×20 microlitro |
| Totale | 20 microlitro | (M2+2) ×20 microlitro |
Tabella 2 Sistema di miscelazione qPCR per M2
*IL configurazione sistema In Tavolo 2 È basato SU IL premessa Quello CIRCUITO INTEGRATO È non aggiunto In PZ E NTC Prima estrazione, COSÌ CIRCUITO INTEGRATO esigenze A Essere aggiunto durante PCR-q Mescolare preparazione. CI aggiungendo metodo Dopo estrazione: Diluire CIRCUITO INTEGRATO di 100 volte con Il DNA diluente E aggiungere 1 μl diluito CIRCUITO INTEGRATO in
ogni PCR-q Mescolare sistema.
**Questo kit fa non contenere ROX Riferimento Tintura. Se ROX riferimento tintura È necessario per IL Vero Tempo PCR amplificatori Quello Voi Sono attualmente utilizzando, 50×ROX Riferimento Tintura (Cat#10200ES) è raccomandato per utilizzo. In Questo caso, il aggiunto volume È 0,8μL, COME mostrato In Tavolo 1. Se usando altro
marche Di ROX prodotti, per favore fare riferimento A loro istruzioni per ROX aggiunta. Se NO ROX riferimento tintura È richiesto, il aggiunto volume È 0 ml.
| Componente | Volume (reazioni 1×40μL) | Volume (M3×40μL) |
| 4× Tampone di reazione MyqPCR | 10 microlitro | (M3+2) ×10 microlitro |
| MyPrimer e sonda MESCOLARE | 1 microlitro | (M3+2) ×1 microlitro |
| Controllo interno (CI) | 1 microlitri* | (M3+2) ×1 ml/0 microlitro |
| ROX | 0,8 ml/0 μL** | (M3+2) ×0.8 ml/0 microlitro |
| Purificato acqua | Fino a 20 microlitro | Fino a (M3+2) ×20 microlitro |
| Totale | 20 microlitro | (M3+2) ×20 microlitro |
Tabella 3 Sistema di miscelazione qPCR per M3
*IL configurazione sistema In Tavolo 3 è basato SU IL premessa Quello CIRCUITO INTEGRATO È non aggiunto A campioni Prima estrazione, quindi CIRCUITO INTEGRATO esigenze A Essere aggiunto durante PCR-q Mescolare preparazione. CI aggiungendo metodo Dopo estrazione: Diluire CIRCUITO INTEGRATO di 100 volte con Il DNA diluente E aggiungere 1 μl in ogni PCR-q Mescolare
sistema.
**Questo kit fa non contenere ROX Riferimento Tintura. Se ROX riferimento tintura È necessario per IL Vero Tempo PCR amplificatori Quello Voi Sono attualmente utilizzando, 50×ROX Riferimento Tintura (Cat#10200ES) è raccomandato per utilizzo. In Questo caso, il aggiunto volume È 0,8μL, COME mostrato In Tavolo 1. Se usando altro
marche Di ROX prodotti, per favore fare riferimento A loro istruzioni per ROX aggiunta. Se NO ROX riferimento tintura È richiesto, il aggiunto volume È 0 ml.
3) Aggiunta di modelli
- Mescolare la miscela qPCR con sufficiente agitazione, centrifugare a bassa velocità e raccogliere il liquido residuo dal tappo
fino in fondo il tubo.
- Aggiungi 20 μL di qPCR Mix in ogni provetta/pozzetto di reazione. Si prega di notare l'aggiunta del corrispondente qPCR Mix in ogni
provette ed evitare di aggiungere errori.
- Aggiungere i template alla provetta/pozzetti che contenevano il mix qPCR. Vedere la Tabella 4 per l'aggiunta dei template.
| Campioni di prova | In ogni tubo o BENE … |
| STUDENTI | 20 μL di miscela qPCR+20 μL Campioni dopo l'estrazione |
| NTC | 20 μL di miscela qPCR+20 microlitro Il DNA Diluizione respingente |
| Codice NC* | 20 μL di miscela qPCR+20 μL Campione negativo dopo l'estrazione* |
| PZ | 20 μL di miscela qPCR +20 μL Positivo controllare |
Tavolo 4 Modelli aggiungendo
*Si consiglia di utilizzare il tampone di diluizione del DNA (40619-E) come modello di NCS per l'estrazione del DNA.
**IL totale reazione volume In ogni tubo/pozzetto È 40 ml.
***Copertina IL tubo coperchio O IL piatto pellicola. Per Evitare che colpisce IL fluorescenza segnale leggendo, per favore Prendere cura non A segno IL tubo coperchio O film
O Anche strofinare IL film ripetutamente con UN raschietto.
****Centrifuga IL reazione tubo O piatto brevemente A Basso velocità Dopo modelli aggiungendo. Dopo sufficiente tremante E mescolare, ripetere centrifuga
A Basso velocità A raccogliere IL liquido da IL coperchio O parete A IL fondo. Evitare bolle Quando operazione. Il linea di base Volere Essere impattato Se IL mescolare
È non misto Bene, quindi Questo fare un passo È molto importante A UN Bene sperimentare risultato.
4) Impostazione dei programmi qPCR
- Impostazioni del file di programma
Esempio (strumento Real-Time PCR System 7500 e software Real-Time PCR v2.4):
Tipo di strumento: 7500 (96 pozzetti)
Tipo di esperimento: Quantificazione-Curva standard;
Chimica: reagenti Taqman®
Velocità di rampa: Standard (~2 ore per completare una corsa)
- Impostazioni del canale di destinazione
In "Definire Obiettivi E Campioni" Di "Piatto Impostare", creare UN Bersaglio 1 canale (FAMIGLIA), selezionare Famiglia COME IL segnalazione gruppo di fluorescenza e MGB o nessuno come la tempra fluorescenza gruppo. Creare UN Bersaglio 2 canale (VICENZA), selezionare IL segnalazione fluorescenza gruppo COME VIC E IL tempra fluorescenza gruppo COME nessuno. In "Assegnare Obiettivi E Campioni" Di "Piatto Impostare", Se NO aggiuntivo ROX tintura È aggiunto, seleziona "nessuno"; Se un aggiuntivo ROX È aggiunto, seleziona
ROX.
- Impostazioni del programma di amplificazione standard
| Numero di serie | Fase di reazione | Temperatura | Tempo | Ciclo(i) |
| 1 | Denaturazione iniziale | 95℃ | 5 minimo | 1 |
| 2 | Denaturazione | 95℃ | 15 secondo |
45 |
| 3 | Ricottura/Estensione (raccolta del segnale di fluorescenza) |
62℃ |
30 secondi |
Tabella 5 Impostazioni del programma di amplificazione standard
- Impostazione della linea di base e della soglia:
Principio Di linea di base regolazione: utilizzo IL automatico linea di base generalmente. Se Bisogno A regolare In manuale, scegliere IL ciclo prima della crescita esponenziale periodo come ciclo di avvio ed evitare la zona di fluttuazione di iniziale fluorescenza raccolta. Scegli il ciclo che è 1-2 cicli prima del Ct del campione di amplificazione esponenziale più antico come
punto finale.
Principio Di soglia regolazione: utilizzare generalmente la soglia automatica. Se è necessario regolare manualmente, la soglia Dovrebbe Essere impostato più alto di IL Negativo campione O IL linea di base rumore, suo generalmente impostato la soglia In IL tardi
fase di per ogni tunnel è necessaria l'amplificazione esponenziale, una soglia relativa indipendente e adatta.
5) Risultato Analisi
- Giudizio sui risultati per PCS, NTC e NCS:
Se IC è stato aggiunto: la specifica di ciascun campione di controllo dovrebbe essere soddisfatti nella Tabella 6:
| Campione di controllo | Famiglia Segnale | Segnale VIC |
| PZ | Ct < 40, e presenta una curva di amplificazione evidente | Ct < 40 e presenta una curva di amplificazione evidente |
| NTC | Ct ≥ 40 o nessuna curva di amplificazione evidente | Ct < 40 e presenta una curva di amplificazione evidente |
| NCS | Ct ≥ 40 o nessuna curva di amplificazione evidente | Ct < 40 e presenta una curva di amplificazione evidente |
Tavolo 6 Risultato sentenza Di PCS, NTC E NCS
Se IC non viene aggiunto: ogni campione di controllo qualità deve soddisfare le specifiche della colonna del segnale FAM nella Tabella 6 e nessun
bisogno di analizzare Canale VIC.
- Giudizio sul risultato per TS
Prerequisito: Esso È necessario determinare se PZ, NTC e NCS ha superato la specifica nella tabella 6 prima di TS analisi dei risultati. Se approvato, allora può procedere al passo successivo. Se non passato, IL STUDENTI risultati Maggio non Essere affidabile, E
è necessario accertarne il motivo.
Se IC è stato aggiunto: trova i risultati corrispondenti giudizio secondo le informazioni sui risultati di FAM e VIC nella Tabella 7:
| Famiglia Segnale | Segnale VIC | Risultato sentenza |
| Ct<40 e presenta evidente curva di amplificazione | Ct<40 e presenta una curva di amplificazione evidente | Positivo |
| Ct≥40 o nessuna curva di amplificazione evidente | Esiste un'inibizione, la l'esperimento deve essere ripetuto | |
| Ct≥40 o nessuna evidenza evidente curva di amplificazione | Ct<40 e presenta una curva di amplificazione evidente | Negativo |
| Ct≥40 o nessuna curva di amplificazione evidente | Esiste un'inibizione, la l'esperimento deve essere ripetuto |
Tavolo 7: Risultato sentenza Di STUDENTI (CIRCUITO INTEGRATO aggiunto)
*Se Là È inibizione per VIC segnale,trattamento È necessario A eliminare IL inibitori O ripetere IL test.
Se IC non è stato aggiunto: trova i risultati corrispondenti giudizio secondo le informazioni sui risultati di FAM nella Tabella 8 , e non c'è bisogno di analizzare il Segnale VIC.
| Segnale FAM | Risultato sentenza |
| Ct<40 e presenta una curva di amplificazione evidente | Positivo |
| Ct≥40 o nessuna curva di amplificazione evidente | Negativo |
Tavolo 8: Risultato sentenza Di STUDENTI (CIRCUITO INTEGRATO non aggiunto)
Appunti
- Si prega di leggere attentamente questo manuale prima di utilizzare questo kit. L'esperimento deve essere condotto in modo standardizzato, inclusa la gestione del campione, la preparazione del sistema di reazione e l'aggiunta del campione.
- Se possibile, svolgere le operazioni di aggiunta dei campioni e di preparazione dei reagenti su ghiaccio.
- Agitare e mescolare bene ciascun reagente prima dell'uso.
- Si prega di operare con camici da laboratorio e guanti monouso, per la tua sicurezza.
- Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca.
[1] Zhao F, Wang X, Li Y, Chen X, Geng Z, Zhang C.Effetti dell'integrazione alimentare con epigallocatechina gallato sulla qualità della carne e sulla capacità antiossidante muscolare dei polli da carne sottoposti a stress termico acuto. Animali (Basilea). 2021;11(11):3296. Pubblicato il 18 novembre 2021. doi:10.3390/ani11113296(IF:2.752)
Pagamento e sicurezza
Le informazioni di pagamento vengono elaborate in modo sicuro. Non archiviamo i dettagli della carta di credito né abbiamo accesso alle informazioni sulla tua carta di credito.
Indagine
Potrebbe piacerti anche
FAQ
Il prodotto è solo per scopi di ricerca e non è destinato all'uso terapeutico o diagnostico su esseri umani o animali. Prodotti e contenuti sono protetti da brevetti, marchi e copyright di proprietà di Yeasen Biotechnology. I simboli dei marchi indicano il paese di origine, non necessariamente la registrazione in tutte le regioni.
Alcune applicazioni potrebbero richiedere ulteriori diritti di proprietà intellettuale di terze parti.
Yeasen è un sostenitore della scienza etica, convinto che la nostra ricerca debba affrontare questioni critiche garantendo al contempo sicurezza e standard etici.