(1) D: Qual è la differenza tra la trasfezione del DNA e la trasfezione di siRNA?

R: 1. Poiché ci sono solo 20 coppie di basi, l'siRNA è molto più piccolo del DNA, che ne contiene migliaia o addirittura più di 10.000.

2. I reagenti e i metodi di trasfezione utilizzati per trasfettare il DNA non sono adatti alla trasfezione di siRNA.

3. La trasfezione di siRNA ha requisiti più rigorosi sulla citotossicità dei reagenti di trasfezione rispetto alla trasfezione del DNA.

(2) D: Il reagente di trasfezione deve essere cambiato dopo la trasfezione?

A: Per il cambiamento medio si possono distinguere due situazioni:

1. Se non si verifica alcun cambiamento del mezzo prima della trasfezione, il mezzo deve essere cambiato circa 6 ore dopo la trasfezione per garantire i nutrienti necessari per la crescita cellulare;

2. Se si verifica un cambiamento prima della trasfezione Il terreno può essere cambiato come di consueto quando è carente di nutrienti.

(3) D: Qual è l'efficienza del reagente di trasfezione PEI per la trasfezione di siRNA e plasmide?

R: Questo reagente di trasfezione PEI è stato sviluppato appositamente per siRNA e la trasfezione plasmidica non è raccomandata.

(4) D: Il reagente di trasfezione può essere congelato?

A: Non congelare, perché il reagente di trasfezione è un reagente di trasfezione cationico PEI. Il congelamento a bassa temperatura distruggerà l'attività del reagente di trasfezione PEI. Pertanto, è meglio conservarlo a 4 gradi per mantenere la migliore efficienza di trasfezione.

(5) D: Come migliorare l'efficienza della trasfezione?

A: a: Densità delle cellule al momento della trasfezione, 30%-50%.

b: Per la diluizione di siRNA e liposomi durante la trasfezione, si deve utilizzare il mezzo Opti-MEM privo di siero.

c: Il mezzo può essere cambiato 4-6 ore dopo la trasfezione.

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