Descrizione
Il reagente di trasfezione universale Hieff Trans™ è un reagente di trasfezione liposomiale multiuso, conveniente ed efficiente sviluppato sulla base delle più recenti nanotecnologie. È adatto per la trasfezione di DNA, RNA e oligonucleotidi, comprese le cellule primarie. Le cellule difficili da trasfezionare, compresi i neuroni, hanno un'elevata efficienza di trasfezione. La sua formula unica consente di aggiungerlo direttamente al mezzo e la presenza di siero non influisce sull'efficienza di trasfezione, il che riduce i danni alle cellule causati dalla rimozione del siero. Non è necessario rimuovere il complesso reagente di trasfezione acido nucleico o sostituirlo con mezzo fresco dopo la trasfezione e il mezzo fresco può anche essere sostituito dopo 4-6 ore in base allo stato nutrizionale delle cellule.
Componenti del prodotto
| Numero del componente | Componenti | Cat#/Taglia | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universale-A | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
| 40808-B | Universale-B | 0,5 ml | 1 ml | 5×1 ml |
Spedizione e stoccaggio
Il prodotto viene spedito con ghiaccio e può essere conservato a 2-8℃ per un anno. Non congelare!
Attenzione
1) Durante l'operazione di trasfezione, è preferibile che la confluenza cellulare raggiunga il 70%-90% e che la densità di placcatura specifica venga determinata in base alla situazione delle cellule.
2) La preparazione dei complessi di trasfezione richiede la diluizione del DNA e dei reagenti di trasfezione in un mezzo privo di siero.
3) Non è possibile aggiungere antibiotici al terreno durante la trasfezione.
4) L'uso di DNA o RNA ad alta purezza aiuta a ottenere una maggiore efficienza di trasfezione, mentre l'endotossina nei plasmidi è il nemico della trasfezione.
5) Conservare a 2-8°C, facendo attenzione a non aprire il coperchio più volte e per periodi prolungati.
6) La concentrazione dell'acido nucleico e il volume del reagente devono essere ottimizzati per il primo utilizzo per ottenere la massima efficienza di trasfezione.
7) Questo prodotto è destinato esclusivamente alla ricerca scientifica!
Istruzioni
Trasfezione del DNA
[Nota] La quantità di reagente di trasfezione utilizzato è influenzata dal tipo di cellula e da altre condizioni sperimentali. Si consiglia di impostare un gradiente per ottimizzare la quantità ottimale di utilizzo per la prima volta.
1) Le cellule vengono piastrate e la confluenza cellulare dovrebbe essere del 70%-90% al momento della trasfezione.
2) Diluire la soluzione Universal-B con il mezzo Opti-MEM secondo la tabella seguente e mescolare delicatamente.
3) Diluire il DNA con il mezzo Opti-MEM per ottenere la premiscela di DNA, quindi aggiungere la soluzione Universal-A e mescolare delicatamente per ottenere il DNA diluito.
4) Aggiungere il DNA diluito alla soluzione Universal-B diluita (rapporto 1:1).
5) Incubare a temperatura ambiente per 5 minuti.
6) Aggiungere goccia a goccia il complesso DNA-liposomi alle cellule e mescolare delicatamente.
7) Incubare a 37°C, incubatore al 5% di CO2 per 48-96 ore fino all'analisi dell'espressione genica.
Trasfezione di siRNA
La procedura per la trasfezione dell'siRNA è la stessa di quella per la trasfezione del DNA, fatta eccezione per il fatto che non è necessario aggiungere la soluzione Universal-A (passaggio 3) durante la diluizione dell'siRNA.
Tabella 1 Quantità di trasfezione in diversi contenitori di coltura cellulare (solo come riferimento)
| Contenitori per coltura cellulare | 96 pozzetti | 24 pozzetti | 6 pozzetti | |
| Cellule aderenti | 1-4×104 | Dimensioni: 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Diluire la soluzione Universal-B con il terreno Opti-MEM secondo la tabella seguente e mescolare delicatamente. | Mezzo Opti-MEM | 5 microlitri | 25 microlitri | 125 microlitri |
| Universale-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 microlitri | |
| Diluire il DNA con il mezzo Opti-MEM per ottenere la premiscela di DNA, quindi aggiungere la soluzione Universal-A e mescolare delicatamente per ottenere il DNA diluito. | Mezzo Opti-MEM | 5 microlitri | 25 microlitri | 125 microlitri |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 mg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universale-A (2 μL/μg DNA) | 0,2 μL | 1 μL | 5 microlitri | |
| Aggiungere il DNA diluito alla soluzione diluita Universal-B (rapporto 1:1). | Soluzione di DNA diluita | 5 microlitri | 25 microlitri | 125 microlitri |
| Universale-B | 5 microlitri | 25 microlitri | 125 microlitri | |
| Incubare a temperatura ambiente per 5 minuti. | ||||
| Complesso DNA-Liposome | Componenti (ogni pozzetto) | 96 pozzetti | 24 pozzetti | 6 pozzetti |
| Opti-MEM | 10 microlitri | 50 microlitri | 250 microlitri | |
| DNA (0,5–5 μg/μL) | 0,1 mg | 0.5 microgrammi | 2,5 μg | |
| Universale-B | 0,2 μL | 1 μL | 5 microlitri | |
| Universale-A | 0,2 μL | 1 μL | 5 microlitri | |
| Aggiungere goccia a goccia il complesso DNA-liposomi alle cellule e mescolare delicatamente. | Complesso DNA-Liposome | 10 microlitri | 50 microlitri | 250 microlitri |
[Nota] La quantità utilizzata nella tabella è solo di riferimento. La quantità specifica di DNA e soluzione Universal-B utilizzata deve essere ottimizzata in base al tipo di cellula e ad altre condizioni sperimentali. Si raccomanda di mantenere il rapporto tra 1:0,5-1:5.
(1) D: Il siero può essere presente durante la preparazione del complesso reagente di trasfezione dell'acido nucleico?
A: La presenza di siero influirà sulla formazione dei liposomi. Si raccomanda di utilizzare un mezzo privo di siero (generalmente un mezzo MEM) quando si preparano complessi di reagenti di trasfezione di acidi nucleici.
(2) D: Il reagente di trasfezione può essere congelato?
R: Questo reagente deve essere conservato a una temperatura compresa tra 2 e 8°C e si deve evitare di aprire ripetutamente e prolungatamente il tappo, poiché l'apertura prolungata del tappo causerà l'ossidazione dei liposomi e comprometterà l'efficienza della trasfezione.
(3) D: A cosa dovrei prestare attenzione quando utilizzo il reagente di trasfezione universale Hieff Trans™?
A: 1) Durante l'operazione di trasfezione, è meglio che la confluenza cellulare raggiunga il 70%-90% e la densità di placcatura specifica venga determinata in base alla situazione delle cellule.
2) La preparazione dei complessi di trasfezione richiede la diluizione del DNA e dei reagenti di trasfezione in un mezzo privo di siero.
3) Non è possibile aggiungere antibiotici al terreno durante la trasfezione.
4) L'uso di DNA o RNA ad alta purezza aiuta a ottenere una maggiore efficienza di trasfezione, mentre l'endotossina nei plasmidi è il nemico della trasfezione.
5) Conservare a 2-8°C, facendo attenzione a non aprire il coperchio più volte e per periodi prolungati.
6) La concentrazione dell'acido nucleico e il volume del reagente devono essere ottimizzati per il primo utilizzo, per ottenere la massima efficienza di trasfezione.
(4) D: È necessario terminarlo dopo la trasfezione?
R: Non è necessario. Non è necessario rimuovere il complesso reagente di trasfezione acido nucleico o sostituirlo con terreno fresco dopo la trasfezione, e il terreno fresco può anche essere sostituito dopo 4-6 ore in base allo stato nutrizionale delle cellule.
(5) D: Il reagente di trasfezione può essere utilizzato per la trasfezione del confezionamento del vettore virale?
A: Sì.L'efficienza del confezionamento del vettore virale non è necessariamente correlata all'efficienza della trasfezione, ma anche alla selezione dei plasmidi di confezionamento e al rapporto tra i plasmidi.
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Indagine
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