La D-luciferina è un substrato comune per l'enzima luciferasi Luciferasi ed è comunemente utilizzata in tutta la biotecnologia, specialmente nell'imaging in vivo in vivo. Il meccanismo d'azione è che la luciferina (il substrato) può essere ossidata per emettere luce in presenza di ATP e luciferasi. Quando c'è un eccesso di luciferina, il numero di quanti di luce prodotti è correlato positivamente con la concentrazione di luciferasi (vedere la figura sotto). Dopo aver transfettato le cellule con un plasmide che trasporta il gene che codifica la luciferasi (Luc) e averlo introdotto in animali da ricerca come topi e ratti, la luciferina viene iniettata nelle cellule e i cambiamenti nell'intensità della luce vengono rilevati da BLI, consentendo il monitoraggio in tempo reale dello stato di progressione della malattia o dell'efficacia terapeutica di un farmaco, ad esempio. L'effetto dell'ATP su questo sistema di reazione può anche essere utilizzato per indicare energia o segni vitali in base ai cambiamenti nell'intensità della bioluminescenza.

La D-Luciferina è anche comunemente usata negli studi in vitro, tra cui l'analisi dei livelli di luciferasi e ATP, l'analisi del gene reporter, il sequenziamento ad alto rendimento e vari test di contaminazione. Attualmente sono disponibili sul mercato tre forme di prodotto: la D-Luciferina (acido libero), il sale di sodio della D-Luciferina e il sale di potassio della D-Luciferina. La differenza principale tra questi tre prodotti sta nelle loro caratteristiche di solubilità; la D-Luciferina (acido libero) è debolmente solubile in acqua e nei sistemi tampone, a meno che non sia solubile in basi deboli come soluzioni di NaOH e KOH. La D-Luciferina sotto forma di sali di sodio e potassio si dissolve molto facilmente e rapidamente in acqua o tamponi, è facile da usare e i solventi non sono tossici, il che la rende particolarmente adatta per esperimenti in vivo. Quando formulata come liquidi, non vi è alcuna differenza sostanziale tra i tre prodotti per la maggior parte delle applicazioni.

Caratteristiche

• Nessuna radiazione, pressoché innocuo per gli organismi viventi.
• Bioluminescenza, nessuna fonte di luce di eccitazione.
• È così sensibile che è possibile rilevarlo in poche centinaia di cellule.
• Buona penetrazione, è ancora possibile rilevare 3-4 cm di profondità nei tessuti.
• Elevato rapporto segnale/rumore, forte segnale di fluorescenza e buona anti-interferenza.

Applicazioni

• Nell'esperimento di tumorigenesi su topi nudi, la crescita del tumore è stata osservata senza invasione in tempo reale, senza misurazione dello stripping del tumore.
• Per testare l'effetto della somministrazione sulla crescita del tumore o sulle metastasi, il substrato della fluoresceina può essere completamente eliminato entro 3 ore, senza interferire con l'esperimento sul farmaco.
• Sono state rilevate la localizzazione e la distribuzione di cellule estranee negli animali.
• Il gene bersaglio o il promotore del gene bersaglio viene fuso con il gene della luciferasi per rilevare cambiamenti nell'espressione genica durante il trattamento farmacologico o la progressione della malattia.
• Monitoraggio del trapianto, della sopravvivenza e della proliferazione delle cellule staminali; tracciamento della distribuzione e della migrazione delle cellule staminali in vivo.

Specifiche

Componenti

Spedizione e stoccaggio

Trasportato in confezioni di ghiaccio; conservato a -20°C asciutto e al riparo dalla luce; valido per 1 anno.

Cifre

Documenti:

Scheda di sicurezza

Manuali

Citazioni e riferimenti:

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