1 ブラストサイジンSの作用機序
ブラストサイジン Sは、ストレプトマイセス グリセオクロモゲネスから抽出されたヌクレオシド系抗生物質で、リボソームにおけるペプチド結合の形成を阻害することで、原核細胞および真核細胞におけるタンパク質合成を特異的に阻害します。その作用機序には、放出因子によって誘導されるペプチジル tRNA の加水分解を阻害し、tRNA と大リボソームサブユニットとの結合を強化することで、ある程度ペプチド結合の形成を阻害することが含まれます。
ブラストシジン S は迅速かつ強力な作用機序を持ち、非常に低い抗生物質濃度でも急速な細胞死を引き起こす可能性があります。細菌や真核生物のタンパク質合成を大幅に阻害するだけでなく、真菌、線虫、腫瘍細胞に対しても活性があります。ブラストシジン S は、bsr または BSD 遺伝子を持つトランスフェクトされた細胞のスクリーニングによく使用されます。
2 ブラストサイジンSの応用
2.1 細胞培養とスクリーニング
- 哺乳類細胞: ブラストサイジン S は、bsr または BSD 遺伝子を持つトランスフェクトされた細胞のスクリーニングによく使用されます。それぞれ B. cereus および Aspergillus 由来のこれらの耐性遺伝子は、ムランシジンを非毒性誘導体に変換することができ、それによって耐性遺伝子を持たない細胞を選択的に殺すことができます。哺乳類細胞におけるブラストサイジン S の作用濃度は 1 ～ 50 μg/mL です。
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セル |
ジェナス |
組織 |
培養培地 |
ブラストサイジンS濃度（μg/mL） |
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ヒーラ |
人間 |
子宮 |
DMEM |
3-10 |
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ヘック293 |
人間 |
腎臓 |
DMEM |
3-10 |
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B16 |
ねずみ |
悪性黒色腫 |
RPMI |
3-10 |
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パソコン1.0 |
ハムスター |
腺癌 |
RPMI |
10-30 |
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チョー |
ハムスター |
卵巣 |
DMEM |
5-15 |
- 細菌の選択: 細菌培養では、推奨濃度 25 ～ 100 µg/mL で耐性遺伝子を持たない細胞を急速に死滅させることができます。
E.coli はブラストサイジン S に対する感受性がやや低いですが、形質転換体はブラストサイジン S に対して耐性があり、50～100 μg/mL ブラストサイジン S の濃度範囲で低塩 LB 培地 (pH 8) でスクリーニングすることができ、高 pH ではブラストサイジン S の活性が向上します。
- 植物細胞: 植物細胞における遺伝子導入実験にも適用可能で、bsr と BSD はスクリーニング マーカーとしてよく使用されます。
2.2 タンパク質合成に関する研究
- ブラストサイジン S は、特に TLR-2 構築物の HEK293-T 細胞および HEK-D5 細胞におけるペプチド結合形成レベルでのタンパク質合成プロセスを研究するために使用されました。
2.3 抗真菌作用
- また、一定の抗真菌作用があり、イネいもち病の予防と治療に使用できます。その殺菌効果は主にタンパク質合成に影響し、胞子の発芽、菌糸の発達、胞子の形成を阻害します。
2.4 その他のアプリケーション
- ブラストサイジンは腫瘍細胞の阻害効果の研究にも使用されています。
- また、耐性遺伝子 bls、bsr、または BSD を含む形質転換細胞の選択剤としても機能します。
3 ブラストサイジン S に関連する実験手順 (哺乳類の安定トランスフェクタントのスクリーニング)
1) ブラストサイジン S は通常 10 μg/mL の濃度で使用されます。細胞は bsr または BSD 遺伝子を持つプラスミドでトランスフェクトされ、ブラストサイジン S を含む通常の成長培地で培養され、安定したトランスフェクタントが選択されます。
2) トランスフェクション後 48 時間で、適切な濃度のブラストサイジン S を含む新鮮な培地で細胞を継代します (注: 抗生物質は、細胞が活発に分裂しているときに最も効果を発揮します。細胞密度が高すぎると抗生物質の効率が低下します。細胞を分割する際、合流率は 25% を超えないようにしてください)。
3) 3～4日ごとに使用済みの培地を取り除き、抗生物質を含む新鮮な培地を追加します。
4) 7 日後、細胞コロニーの形成を確認します。宿主細胞の種類とトランスフェクション/選択効率によっては、コロニーの形成にさらに 1 週間以上かかる場合があります。
5) 耐性クローン 5～10 個を 35 mm 細胞培養皿に移し、選択培地で 7 日間維持します。その後、細胞毒性アッセイを実行してテストします。
4製品の推奨
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製品名 |
猫＃ |
仕様 |
外観 |
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ブラストサイジンS CAS番号：3513-03-9 |
60218ES10 |
10mg |
溶液（10 mg/mL、HEPES緩衝液、pH 7.5） |
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60218ES50 |
5×10mg |
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60218ES60 |
10×10mg |
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|
60218ES80 |
1グラム |
粉末（使用時に滅菌水または緩衝液で5〜10 mg/mLの原液を調製してください） |
弊社の試薬を使用した5件の論文
[1] Mo J、Tan K、Dong Y、Lu W、Liu F、Mei Y、Huang H、Zhao K、Lv Z、Ye Y、Tang Y。ユーイング肉腫における腫瘍原性ドライバーEWSR1::FLI1をFACT複合体の阻害を介して標的とする治療。Oncogene。2023年1月;42(1):11-25。doi：10.1038/s41388-022-02533-1。Epub 2022年11月10日。PMID：36357572。 （IF： 8.0 ）
[2] Tan K, Mo J, Li M, Dong Y, Han Y, Sun X, Ma Y, Zhu K, Wu W, Lu L, Liu J, Zhao K, Zhang L, Tang Y, Lv Z. SMAD9-MYCN正のフィードバックループはMYCN増幅神経芽腫の独特な依存性を表す。J Exp Clin Cancer Res. 2022年12月20日;41(1):352. doi: 10.1186/s13046-022-02563-3. PMID: 36539767; PMCID: PMC9764568. (IF: 11.3 )
関連商品6件
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製品名 |
猫＃ |
仕様 |
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シプロフロキサシン塩酸塩 |
60201ES05/25/60 |
5/25/100g |
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アンピシリンナトリウム塩 |
60203ES10/60 |
10/100g |
|
ドキシサイクリン塩酸塩 |
60204ES03/08/25 |
1/5/25g |
|
クロラムフェニコール、USPグレード |
60205ES08/25/60 |
5/25/100g |
|
カナマイシン硫酸塩 |
60206ES10/60 |
10/100g |
|
テトラサイクリン HCl テトラサイクリン塩酸塩 (USP) |
60212ES25/60 |
25/100g |
|
塩酸バンコマイシン |
60213ES60/80/90 |
100mg/1g/5g |
|
ゲンタマイシン硫酸塩 |
60214ES03/08/25 |
1/5/25g |
|
スペクチノマイシン塩酸塩 |
60215ES08 |
5g |
|
フレオマイシン（溶液中20 mg/mL） |
60217ES20/60 |
20/5×20mg |
|
ブラストサイジンS（ブラストサイジン） |
60218ES10/60 |
10/10×10mg |
|
ナイスタチン |
60219ES08 |
5g |
|
G418硫酸塩（ジェネティシン） |
60220ES03/08 |
1/5g |
|
ピューロマイシン（溶液10 mg/mL） |
60209ES10/50/60/76 |
1×1 /5 ×1 / 1 0 ×1 /50 ×1 mL |
|
ピューロマイシン二塩酸塩 |
60210ES25/60/72/76/80 |
25/100/250/500mg / 1g |
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ハイグロマイシンB（50 mg/mL） |
60224ES03 |
1g（20mL）/10×1g（20mL） |
|
ハイグロマイシンB |
60225ES03/10 |
1/10グラム |
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エリスロマイシン |
60228ES08/25 |
5/25g |
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ティメンティン |
60230ES07/32 |
3.2/10×3.2g |
|
オーレオバシジンA (AbA) |
60231ES03/08/10 |
1/5×1/10×1mg |
|
ポリミキシンB硫酸塩 |
60242ES03/10 |
1/10MU |