1. RNA の分解を防ぐにはどうすればよいでしょうか?

2. RNase 阻害剤とは何ですか?

3. RNase 阻害剤は何をしますか?

4. マウス RNase 阻害剤の特徴は何ですか?

5. 関連製品と実績

6. 関連製品

7. よくある質問

1. RNA の分解を防ぐにはどうすればよいでしょうか?

RNase は核酸代謝において重要な役割を果たしており、ほぼすべての種類の原核生物および真核生物に存在します。RNase は、微生物の侵入を防ぐために涙、唾液、汗などの体液中に分泌され、皮膚の残骸にも存在します。ただし、ほとんどの環境では、RNase の主な発生源は微生物、つまり細菌や真菌です。RNase は不活性化が非常に難しく、高い安定性、耐熱性、耐酸性、耐アルカリ性を示します。熱変性後、すぐに元の構造に戻ります。RNase は通常非常に活性が高く、真核生物と原核生物の両方の細胞と組織に広く分布しています。サンプル内の RNA は、わずかな量の RNase 汚染で完全に分解される可能性があります。研究における RNase 汚染は、内部ソースと外部ソースの両方から発生する可能性があります。細胞内の RNase は主に内因性の汚染源ですが、外因性汚染源には実験用品、研究室環境、実験者自身が含まれます。RNase、特に RNase A ファミリーのメンバーは、多数の分子内ジスルフィド結合を形成できる少数のシステイン残基を含む小型のコンパクトなタンパク質です。室温に戻した後、変性剤がない場合、変性した RNase は自然な構造と一部の機能を回復します。そのため、RNase は繰り返しの凍結融解サイクルの後でも、オートクレーブ処理後でもかなりの活性を維持します。これらの酵素は安定しているため、多くの除染方法に対して耐性があります。通常、表面や溶液から RNase を除去するには強力な化学的方法が必要です。

脆弱なRNAの劣化を避けるために、RNAを扱う際には特別な予防措置を講じる必要があります。外因性のRNaseを制御するために、操作者は実験中に手袋を着用し、皮膚、ドアハンドル、および通常の物体の表面に触れた後は手袋を交換する必要があります。また、操作者はRNA操作に特別なピペットガンを使用し、RNaseフリーの壁チップ、遠心管、化合物、および試薬を使用する必要があります。換気口や開いた窓から離れるか覆うかし、人の少ない場所をRNaseフリーエリアとして使用します。また、RNAの抽出と分析中は、RNase汚染を引き起こす可能性のある他の実験を行わないでください。
内因性RNaseの活性を阻害する方法は、まずサンプルを保存することです。組織を採取した後、RNAを直接抽出しないでください。代わりに、液体窒素で-80°Cの環境で迅速に凍結して保管し、できるだけ早く実験を実行してRNAの劣化を最小限に抑える必要があります。細胞溶解物にRNase阻害剤を添加して、細胞を破壊すると同時にRNaseを不活性化し、細胞破壊中に放出されるRNaseの活性を最小限に抑えます。すべての試薬と機器は、使用前にRNaseを不活性化するために特別に処理する必要があります。

さらに、RNA 阻害剤は RNase 活性を阻害し、RNA の RNase 分解を防ぐために使用できます。RNA 阻害剤にはいくつかの種類があります。

• ジエチルピロカーボネート (DEPC): 強力ですが完全な RNase 阻害剤ではありません。RNase の活性遺伝子群のヒスチジンのイミダゾール環と結合してタンパク質を変性させ、酵素の活性を阻害します。
• グアニジンイソチオシアネート：現在最も効果的な RNase 阻害剤と考えられており、組織を溶解しながら RNase を不活性化し、細胞構造を破壊し、核酸を核タンパク質から解離させることができ、また RNase に対して一定の効果があり、強力な変性効果もあります。
• バナジルリボヌクレオシド複合体: 酸化バナジウムイオンとヌクレオシドによって形成される複合体で、RNase と結合して遷移類似体を形成し、RNase の活性をほぼ完全に阻害します。
• RNase のタンパク質阻害剤 (RNasin): ラットの肝臓またはヒトの胚盤から抽出された酸性糖タンパク質である RNasin は、さまざまな RNase に結合して不活性化する RNase の非競合阻害剤です。
• その他：SDS、尿素、珪藻土などもRNaseに対して一定の阻害効果があります。

2. RNase 阻害剤とは何ですか?

RNase 阻害剤は、RNase の活性を阻害できる物質の一種です。一般的な RNase 阻害剤には、ジエチルピロカーボネート (DEPC)、グアニジンイソチオシアネート、リボヌクレオシドバナジル複合体 (RVC)、および RNase のタンパク質阻害剤 (RNasin) などがあります。これらのうち、DEPC とグアニジンイソチオシアネートには一定の毒性があり、RVC は PCR ポリメラーゼに阻害効果があり、その後の実験に悪影響を及ぼします。RNasin は毒性がなく、RNase の非競合阻害剤であり、さまざまな RNase に結合して不活性化することができます。

3. RNase 阻害剤は何をしますか?

RNase 阻害剤は、このような汚染物質を抑制および制御するために、RNA の酵素操作における予防措置として一般的に使用されています。RNasin は、ラットの肝臓またはヒトの胚盤葉から抽出された酸性糖タンパク質で、非共有結合的に RNase に特異的に結合して複合体を形成し、RNase を不活性化することで RNA の完全性を保護します。現在、RNase 阻害剤は、cDNA 合成、RT-PCR、in vitro 転写/翻訳反応、または RNA 精製などのアプリケーションで RNA の劣化を防ぐのに役立ちます。

4. マウス RNase 阻害剤の特徴は何ですか?

組み換えマウス RNase 阻害剤には、ヒト由来の RNase 阻害剤に含まれる 2 つの酸化感受性システインが含まれていません。そのため、マウス RNase 阻害剤は高い抗酸化活性を持ち、低 DTT 実験に対してより安定しています。さらに、Yeasen のマウス RNase 阻害剤には次の特徴があります。
1) 万能な RNase 阻害: YEASEN のマウス RNase 阻害剤は、RNase A、RNase B、RNase C などを特異的に阻害します。
2) 多様な反応条件：RNase阻害剤はpH 5.0～9.0、25℃～55℃で活性を示し、耐熱性逆転写酵素に適しています。
3) 複数の下流実験が可能: RNase 阻害剤を Taq DNA ポリメラーゼ、AMV または M-MuLV 逆転写酵素、またはファージ RNA ポリメラーゼ (SP6、T7、または T3) と併用した場合、ポリメラーゼ活性の阻害は観察されません。
4) 大量生産品：20億Uの単一製造能力は、製品の均質性、供給安定性、適時性を確保することでコスト管理に役立ちます。
5) バッチ間の一貫性: ISO13485 品質管理システムによる成熟したタンパク質発現および精製プラットフォーム、品質要件による品質管理テストにより、バッチ間の製品安定性を保証します。

5. 関連製品と実績

A. RNase阻害剤はRNaseの活性を阻害する

1μgのHEK細胞総RNA、1μLのRNase阻害剤は5ngのRNaseを効果的に阻害できます。

図 1. マウス RNase 阻害剤の阻害効果。

B. RNase阻害剤はqPCR検査で外国製品を上回る

Yeasen 社および R* 社のマウス由来 RNase 阻害剤 (MRI) の阻害効果は、同一の実験環境下で qPCR 技術を使用して測定され、YEASEN マウス由来の RNase 阻害剤はシステム内の RNase A を効率的に阻害しました。阻害効果は競合製品よりも優れていました。

図2. R* MRI RNase阻害試験

注: 図の曲線は、左から右に、陽性コントロール (RNA のみ、RNase および MRI なし)、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、および陰性コントロール (RNA + RNase、MRI なし) です。

図3. Yeasen MRI RNase阻害試験

注: 図の曲線は、左から右に、陽性コントロール (RNA のみ、RNase および MRI なし)、80 U MRI、60 U MRI、40 U MRI、30 U MRI、20 U MRI、10 U MRI、陰性コントロール (RNA + RNase、MRI なし) です。

図4. Yeasen MRIとR* MRIのRT-qPCR結果のCT

6. 関連製品

Yeasen が提供できる関連製品を表 1 に示します。

表1. 製品一覧

7. よくある質問

Q1: マウス RNase 阻害剤には RNase が含まれていますか?
A: 各試薬は RNase 活性を検出し、マウス RNase 阻害剤が RNase 汚染を引き起こさないことを確認します。
Q2: マウス RNase 阻害剤は下流の PCR 実験に影響を与えますか?
A: 影響はありません。マウス RNase 阻害剤の各バッチは品質テスト後にゲノム汚染がないことが確認されており、RT-PCR および RT-qPCR 研究に使用できます。
Q3: マウスRNase阻害剤は不活性化されますか?
A: 阻害剤は 65°C を超える温度では不活性化され、激しい撹拌によっても不活性化が起こります。
Q4: 反応システムを調製するためにマウスRNase阻害剤を使用する場合、どのような予防措置を講じる必要がありますか?
回答: システムを準備する際、RNase 汚染源となる可能性のある他のコンポーネントを追加する前に、まず RNase 阻害剤を追加できます。
Q5: マウスRNase阻害剤にはエンドヌクレアーゼ活性とエキソヌクレアーゼ活性がありますか?
回答: エンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼ活性がないため、生成物の収量が向上します。

読書に関して：

マウスRNase阻害剤 - RNase汚染を排除しRNAを保護する

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